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南京億迅生物科技有限公司
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TTC染色液2％使用步驟介紹
2024-1-30 閱讀(680)
TTC染色液2％使用步驟介紹
【產(chǎn)品名稱】 TTC染色液2％
【產(chǎn)品規(guī)格】 ：100ml
【儲存條件】 ：-20℃冰凍
【有效期】 ：6個月
【產(chǎn)品介紹】 ：
2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC)，分子量為334.80，分子式為C19H15ClN4，CAS號為298-96-4。TTC是脂溶性光敏感復(fù)合物，最初用于檢測種子生存能力，后來用于染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞，TTC是呼吸鏈中吡啶核苷結(jié)合酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，TTC與正常組織中的呼吸酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)呼吸酶活性下降，不能反應(yīng)，故不會產(chǎn)生變化呈蒼白色，該染色是一種用于評價組織內(nèi)脫氫酶活性的大體染色方法。
TTC染色液(2%)對心肌梗死及腦組織壞死區(qū)的觀測較電鏡早3～6h，較光鏡早24h，多用于尸檢中的新鮮心臟組織和腦組織以及實驗動物模型早期梗死組織的染色。其特點：①TTC染色直接取材于新鮮組織即可染色，無需固定、包埋等步驟；②TTC染色時間短，一般20~30min；③TTC染色液可重復(fù)使用，10ml可染20張片子。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、生理鹽水
2、低溫冰箱
3、4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林
操作步驟(僅供參考)：
(一)腦組織染色
1、取待檢新鮮腦組織樣本(一 般可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦)取出后-20℃速凍20~ 30min,便于切片。
2、將待檢腦組織切片,一般動物樣本層厚2~ 3mm ,人的樣本層厚3 ~ 5mm ,可連續(xù)切4~5張。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間(參考:張均田主編，現(xiàn)代藥理試驗方法)。
3、切片入TTC Stain(2%)避光浸染30 ~ 35min。
4、切片入4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林中固定4~ 24h。
5、吸干組織表面清水，應(yīng)用IPP等圖像分析系統(tǒng)測量腦梗死面積并計算大腦梗死體積。
（二）種子染色
1、取不同活力的種子用刀片做橫切和沿種胚中央準(zhǔn)確縱切,取每粒種子的一半備用。
2、將上述種子置于TTC染色液(2%)中, 37°C避光孵育20min。
3、倒出染色液，自來水沖洗2~3次，立即觀察種胚著色情況。
染色結(jié)果：
正常心肌或腦組織 | 紅色 |
心肌或腦梗壞死區(qū) | 蒼白色 |
缺血腦組織 | 介于紅色與蒼白色之間 |
注意事項：
1、 TTC Stain(2%)對人體有輕微刺激性，請注意小心防護(hù)。
2、取腦時應(yīng)仔細(xì)保持大腦的完整性。
3、如果染色效果不佳，應(yīng)適當(dāng)延長染色時間。
4、樣本越新鮮越好，為了防止正常心肌及腦組織的酶活性減弱或消失，應(yīng)盡快染色。
5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴-次性手套操作。
