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RTS BL21(DE3)表達感受態細胞使用方法
2023-5-18 閱讀(422)
RTS BL21(DE3)表達感受態細胞使用方法
RTS（Room Temperature Stable）系列感受態細胞，其室溫可保存3天、-20°C可保存2年（推薦保存溫度）、-80°C可長期保存性能無下降。運輸過程中無需干冰，可常規冰袋運輸（推薦運輸溫度）。RTS表達感受態細胞均為熱激感受態細胞，轉用于蛋白表達（不可用于克隆和載體構建），經42°C熱激1min可獲得105～106cfu/μg效價，可滿足質粒轉化要求。該制品使用簡單、運輸、儲存方便。
使用方法
1. 從-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent融化，放置于冰上。
注意：該試劑含長鏈帶電化合物，允許反復凍融20次，使用完畢后繼續-20°C保存。
2. 取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中，加入10～100 ng質粒DNA（不可使用連接產物），槍頭吹打混合均勻，冰上放置2min。
注意：放置時間不要超過30min，過長時間會導致核酸聚合，從而影響轉化效價。
3. 將上述混合物（50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和質粒DNA）加入到一支RTS表達感受態細胞干粉中，槍頭輕輕吹打，溶解細胞干粉，置于冰上15min。
注意：使用RTS 表達感受態細胞干粉，輕甩干粉至管底部，如果發現干粉已經溶解則不可使用。
4. 置于42°C熱激1min后，迅速置于冰上急冷2min。
5. 將熱激完畢的感受態細胞轉移到含有450 μl不含抗生素的SOC（或LB）培養基，37°C振蕩（225 rpm）培養60min。使質粒上抗性標記基因表達，菌體復蘇。
6. 取200 μl復蘇菌液涂布到含相應抗生素的LB瓊脂平板表面。
7. 將平板置于37°C培養，12~18小時后可出現菌落。
8. 獲得的表達菌，可使用IPTG進行誘導表達，從而獲得重組蛋白。
