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南京億迅生物科技有限公司
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植物超氧陰離子染色液(NBT法)使用說明
2023-4-21 閱讀(2324)
植物超氧陰離子染色液(NBT法)使用說明
產品簡介
植物組織在脅迫環境條件下會產生多種活性氧（ROS），ROS活性非常大且其不穩定，因此ROS的檢測通常因其終產物而定。超氧陰離子是活性氧的一種，屬于一種含氧自由基，能將NBT（氮藍四唑）還原成不溶于水的藍色甲瓚化合物，從而定位組織中的超氧陰離子。根據基本原理也稱其為NBT法。本產品就是基于以上原理，用于植物活組織中的超氧陰離子染色。一般應用于較嫩的根尖、葉片等的整體染色，染色后有超氧陰離子聚集的部位呈藍色至深藍色。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期12個月。
組成
組分 | 規格 | 保存 |
NBT | 50mg | 4℃ |
Tris緩沖液(pH7.4) | 100ml | RT |
NBT樣本保存液 | 2*100ml | RT |
說明書 | 1份 | |
使用方法
1. 試劑準備：將50 mg NBT以Tris緩沖液(pH 7.4) 100 mL充分溶解，得到NBT染色工作液，避光4℃保存，一周內有效。
2. 采集植物幼苗或根尖，純水稍洗凈，濾紙上吸干多余水分。將植物幼苗或根尖浸入NBT染色工作液中，常溫避光浸染2-6 h，至陽性部位出現深藍色，其余部位為淡藍色或近無色或呈植物本身的顏色即可（根據植物幼嫩程度。顯色程度調整染色時間）。
3. 用鑷子將植物幼苗或者葉片小心取出，純水漂洗3-5次，置于濾紙上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h，目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素或者淡藍色背景，處理期間可多次更換新鮮的95%乙醇。
4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片，浸入純水中來回漂洗3-5次，置于濾紙上吸干多余水分后，將樣本轉入適量NBT樣本保存液中浸泡30 min后，隨后可取出拍照。樣本可置于該溶液中常溫保存一周。
注意事項
1. NBT染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周內使用。存放時間過久，會影響顯色。
2. 因任何外在因素都可能刺激植物應激產生超氧陰離子，因此植物樣本需要新鮮采集，并盡快完成染色。建議做陰性及陽性空白對照組。
3. 樣本染色完成后盡快拍照保存結果。
4. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
