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碘化丙啶（PI）兼容于各種細胞標記技術
2022-5-25 閱讀(4898)
碘化丙啶（PI）兼容于各種細胞標記技術
產品描述：科研試劑，廣泛應用于分子生物學，藥理學等科研方面，嚴禁用于人體。核酸熒光染色劑。碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現與DNA結合。這種結合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結合一個染料。PI也能與RNA結合，需要用核酸酶處理來區分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最大激發/發射波長是493/636nm。一旦與核酸結合，熒光信號明顯增強20-30倍，最大激發波長向紅色波段遷移~30-40nm，最大發射波長向藍色波段遷移~15nm，從而使其最大激發/發射波長變為535/617nm。PI的摩爾吸光系數相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標記抗體，只需要使恰當的濾片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細胞儀以及熒光計分析。PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關的研究。也可以用作多重熒光染色的復染劑，兼容于各種細胞標記技術，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結構特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細胞周期的檢測。
PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色，常被用來與Calcein-AM，Hoechst 33258/33342或FDA等熒光化合物一起使用，同時對活細胞和死細胞進行染色和鑒定，用于細胞凋亡相關研究。PI的單獨染色可以進行細胞周期的檢測。PI適用于熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，流式細胞儀及熒光分析儀。
使用方法：
1. 儲備液配制：將碘化丙啶粉末充分溶解于去離子水中配制成1mg/ml（1.5mM）溶液，于+4℃避光保存，可穩定保存6個月以上。
2. 使用方法：
2.1貼壁細胞復染步驟（熒光顯微鏡檢測）
1）樣本準備：根據自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復染要求細胞經透化處理。
2）RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。
a， 于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；
b， 將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；
c， 用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min。
3）復染：
a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；
b，直接用2X SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片。染色1-5min。
c，2×SSC清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片。
d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
