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腺苷脫氨酶（ADA）測試盒說明書

一、測定原理

腺苷脫氨酶（Adenosine deaminase，ADA）催化腺嘌呤核苷水解，產(chǎn)生次黃嘌呤核苷和氨，然后對產(chǎn)生的氨進行顯色，從而可以計算血清 ADA 的活性。

腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒 

二、試劑組成及配制（100 管/48 樣）：

試劑一：粉劑×6 支，稀釋液 5ml×6 瓶，4℃保存，臨用前 2 小時每支粉劑用 1 瓶稀釋液溶解。

[注]:需充分混勻*溶解，否則會影響結(jié)果。配好后4C保存48小時。

試劑二：粉劑×2 支，稀釋液 100ml×2 瓶，臨用時每支粉劑用 1 瓶稀釋液溶解即成，4℃避光

腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒 

保存。

試劑三：貯備液 2ml×2 瓶，稀釋液 100ml×2 瓶。臨用時每瓶貯備液用 1 瓶稀釋液稀釋

即成，4℃避光保存，可穩(wěn)定兩個月。

試劑四：1mg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 1ml×1 瓶，4℃保存。

25µg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取 1mg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0.25ml 用雙蒸水定容至 10ml，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒 

三、操作表：

混勻，37℃水浴 30 分鐘后，室溫靜置 10 分鐘，波長 640nm，1㎝光徑，雙蒸水調(diào)零，測各管吸光度值。

【注】本試劑盒可測定10%組織勻紫中的ADA. 但是顯色后需3500轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘后才能進行比色

腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒 

四、單位定義與計算公式：

（一）、血清中 ADA 酶活性的計算：

1、單位定義：1ml 血清在 37℃和底物作用 60 分鐘產(chǎn)生 1µg 氨氮為一個酶活性單位。

2、計算公式：

腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒 

血清中ADA   測定OD值 - 對照OD值   標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度               活性 (U / ml ) ⁼ 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 ^´ 25m g氨氮 /ml

1. 計算舉例

取某人血清按操作表進行ADA的檢測，測得各管吸光度為：空白管0.08，標(biāo)準(zhǔn)管0. 070，測定管0. 173，對照管0.113 。則計算如下:

血清中ADA   測定OD值 - 對照OD值   標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度               活性 (U / ml ) ⁼ 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 ^´ 25m g氨氮 /ml

    0.173 - 0.1131

 ⁼    0.070 - 0.008    ^{´25 =24.1} (U / ml )

（二）、組織勻漿中 ADA 酶活性的計算：

1、單位定義：每毫克組織蛋白在 37℃和底物作用 60 分鐘產(chǎn)生 1µg 氨氮為一個酶活性單位。

2、計算公式：

        3、計算舉例:

取10%雞肝組織勻漿按操作表進行ADA的檢測，測得各管吸光度為:空白管值0.008,標(biāo)準(zhǔn)管OD值0.070,測定管OD值0.237,對照管OD值0.202，測得10%雞肝組織勻漿的蛋白含量^*為14. 14mgprot/ml.則計算如下:

五．測定意義

ADA廣泛分布于各組織中，以盲腸、小腸粘膜和脾中含量高，肝中含量僅為小腸的7%~14%，肝臟中90%在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核含量低，但卻是胞核中有關(guān)核酸代謝酶中含量的一個。

在肝臟疾病中，ADA 活性增高。阻塞性黃疸時此酶活性一般不升高， 而在肝實質(zhì)性損傷時，此酶和ALT同時升高，故有助于鑒別。在慢性活動性肝炎和肝硬化時ALT陽性率較低，而ADA陽性率可達90%左右，增高較明顯。

腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒