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IHC之石蠟切片16種常見問題全解析

2020-12-14  閱讀(4371)

樣本的制備是IHC實驗成功的前提條件。樣本完成石蠟包埋后,需要成約3-4um的薄片。本文主要介紹了切片小技巧及過程中容易出現(xiàn)的16種問題


切片小技巧
②切片厚度3-4μm(淋巴結、扁桃體、鼻咽、扁桃體2-3μm;脂肪5-6μm)
④切片動作輕,用力均勻。
⑥刀片鋒利,切片角度5°,切片平整無褶皺和收縮。
⑧蠟塊表面有鈣點,應20%HCL表面泡1-2h,水洗后切。
切片光面朝下展片、撈片。
攤片水溫利于展平又不熔化,必要時用20%酒精攤片。
細小組織(穿刺、內(nèi)鏡小標本)可以多貼幾個。
在烘烤切片前應做好排水,烤片溫度高于石蠟熔點5-10℃。
問題1 細胞皺縮和收縮;核“起泡”變大損傷;膠原染色嗜堿性
原因:石蠟溫度過高。
解決方法:烤箱溫度高于石蠟熔點5-10℃為佳。

問題2 切片卷成致密團
原因:①刀鈍;②傾斜角太小;③切片太厚。
解決方法:①換新刀片;②如果間隙角充分,降低傾刀的斜度。
①組織固定、脫水、透明不*,浸蠟不透;浸蠟包埋溫度過高或時間過久。
解決方法:問題4過分的壓縮
原因:刀片鈍;組織或石蠟過軟;用力太猛,速度太快。
解決方法:②③
原因:刀刃不鋒利,刀間隙角度大;蠟塊內(nèi)組織上下端留蠟邊太少或不整齊,刀邊碎片;室溫過低或石蠟過硬。
移動刀口或更換刀片,檢查刀的角度,清潔刀片和刀架背面;在低熔點的石蠟中重新包埋;提高室內(nèi)溫度或溫暖蠟塊表面(哈氣等);切片厚度適宜(根據(jù)組織類型)。
①②③④①②③④水,開啟加濕器;問題7 切片條帶彎曲不直

原因:②蠟塊下邊與刀口不平行;④組織本身硬度不一致。
③移動刀片或更換刀片;問題8 蠟塊組織脫落
原因:②蠟塊凍時間過長,切片時易出現(xiàn)蠟塊脫落現(xiàn)象。
②切片動作小、勻速。
①取材時未取中病灶,組織塊太大,太厚;③組織塊內(nèi)組織不平坦;⑤切片時粗修過多(切削過深)或過少(沒切到足夠的深度)。
解決方法:②組織在包埋模中均勻鋪平;④切片方向:軟到硬,易到難,主到次。
①切片機維護不當,切片厚度設置錯誤;③石蠟過熱;解決方法:①降低切片厚度設置;③使用適合組織類型和密度熔點的石蠟;問題11 切片縱裂,損傷,刀痕
原因:②刀片缺口;④石蠟中有雜質。
①更換刀片或移動刀口;③仔細清潔刀刃以除去多余的石蠟堆積;問題12 切片厚薄不均勻/刀/百葉窗/搓衣板
原因:②切片刀不鋒利,刀間隙角(或傾斜度)太大;④切片機部件松動或磨損;⑤組織致密或堅實;⑥主軸伸出太長。解決方法:②更換刀片,減少傾斜度;④均速慢切;⑥主軸搖回復原。
①攤片溫度不合適,組織未充分伸展;③石蠟熔點低,過軟或室溫較高;④組織缺乏一致性。
①調小刀角度,邊切邊向蠟塊吹氣用10-20%酒精攤片,利用濃度差,水的張力來展片;③更換刀片或移動刀口;問題14 切片裂縫/碎裂
原因:②攤片水溫過高,攤片時間長導致過度延伸;④烤片前切片排水不凈。
解決方法:②在攤片時輕輕延伸蠟帶,去除褶皺和折疊;④在切片和漂片過程中,小心操作蠟帶;問題15 柵狀裂和龜裂
原因:②攤片水溫過高;④切片過程中過度冷凍。
解決方法:②降低攤片水溫;④勻速慢切,邊切邊對蠟塊吹氣。
撈片時切片下面有氣泡。
解決方法:②切片要干凈無污染;<span font-size:14px;"="" style="margin: 0px; padding: 0px;">③撈片前將組織下的氣泡趕走



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