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上海雅吉生物科技有限公司
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皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
2023-5-19 閱讀(81)
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
一、產品簡介：
皮膚組織蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種動物皮膚組織樣品中提取蛋白。
本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。
本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為不具有天然蛋白構象的非活性蛋白。
本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
本試劑盒提取的蛋白樣本
二、產品特點：
1.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至 30分鐘-1小時。
2.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含
6.種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲蛋白酶、半胱蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書產品組成：
名稱規格 | 50T | 100T |
蛋白提取液 A | 25 ml | 50 ml |
蛋白酶抑制劑混合物 B | 100 ul | 200 μl |
注意：蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以 2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。 | ||
四、自備材料：
1、離心機，振蕩器，勻漿機/勻漿器，渦旋混勻器，移液器，冰箱
2、PBS緩沖液 ，蛋白定量試劑盒
3、離心管，吸頭，一次性手套
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
五、操作步驟(僅供參考)：
1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
6.可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
1)提取液準備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物B和2ul蛋白酶抑制劑混合物C，混勻后置冰上備用。
2）取100-200mg皮膚組織樣本，用PBS洗干凈，然后用手術剪刀盡可能剪碎，加入500ul蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3）將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩30-40分鐘。
4）在4℃，10000-14000×g 條件下離心15分鐘。
5）將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到皮膚組織蛋白。
6）將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
六、注意事項：
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑 A 的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。皮膚組織蛋白質含量較低，適當加大組織上樣量。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford 法，因為試劑A中含有干擾 Bradford 法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用 Bradford 法定量。
3、正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。
4、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底， 避免開蓋時試劑損失。
5、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
6、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
7、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并清除殘留清潔劑。
8、實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。
七、有效期：2-8 ℃避光有效期為一年
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
