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青島捷世康生物有限公司
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閱讀：1753發(fā)布時間：2019-3-6
抗壞血酸（Vc）測試盒說明書
一、試劑盒組成及配置（50T/48樣)
試劑一：貯備液5mlx1瓶，4℃保存6個月。
試劑一應用液配制：用時按照試劑一貯備液：雙蒸水=1:14稀釋，混勻制備
試劑二：粉劑x1支，4℃保存6個月。
試劑二應用液配制：用時一支粉劑加0.36ml冰醋酸再加水至40ml，
溶解，4℃保存。
試劑三：白色結晶體粉劑x1支，4℃保存6個月。
試劑三應用液配制：因膠南溶解，用前2-4小時加95%乙醇或無水乙
醇60ml充分溶解，制備，4℃保存。
試劑四：黃色貯備液0.2mlx1瓶，冰箱4-8℃避光保存，貯存時間6個月。
試劑四應用液配制:用時取0.15ml試劑貯備液加水至25ml制備。現(xiàn)用現(xiàn)配
試劑五：液體6mlx1瓶，4℃保存6個月。
試劑六：Vc標準品：粉劑6mgx3支，每瓶內含*，4℃保存6個月。
60ug/ml Vc標準品應用液的配制：將1支標準品粉劑溶于10ml試劑一應用液中，制備。
6ug/ml Vc標準品應用的配制：取60ug/ml Vc標準品應用液再用試劑
一應用液10倍稀釋備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。
注：*標準品易氧化，因此在樣本上清液制備好后在配標準，并在10分鐘內進行檢測。
二、操作過程：
1、上清液制備：取樣本0.15ml加1號試劑0.45ml，旋渦混勻，放置15分
鐘后離心，3500～4000轉/分，離心10分鐘，上層清亮液體為上清液。
2、上清液中Vc的測定：
| 空白管 | 標準管 | 測定管 | ||||
| 試劑一（mL） | 0.4 | |||||
| 6ug/ml Vc標準應用液（ml） | 0.4 | |||||
| 上清液（ml） | 0.4 | |||||
| 試劑二應用液（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 | |||
| 試劑三（ml） | 1 | 1 | 1 | |||
| 試劑四（ml） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | |||
| 充分混勻，37℃水浴30分鐘 | ||||||
| 試劑五 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | |||
充分混勻，靜置10分鐘，波長636nm,1cm或者0.5cm光徑，雙蒸水凋零，測定各管吸光度值。
三、計算公式：
1、血清（漿）的計算與舉例：
①、計算公式：
②、計算舉例：
例1：取血清0.15ml，按操作表操作，測得空白管OD為0.031，標準管OD為0.184，測定管OD為0.144，則計算結果為：
2：組織的計算與舉例：
①、計算公式：
②、計算舉例：
例1: 取 10%大鼠肝勻漿0.15ml，按操作表操作，測得空白管OD為0.032，標準管OD為0.184，測定管為OD為0.146，同時測得10%大鼠肝勻漿蛋白濃度為8.5mgprot/ml。
則計算結果為：
例2：取20%輪蟲勻漿0.15ml，按操作表操作，測得空白管OD為0.031，標準管為OD為0.186，測定管為0.177，同時測得20%輪蟲勻漿蛋白濃度為0.8537mgprot/ml。則計算結果為：
四、測定原理：
本法對Fe與還原性抗壞血酸迅速作用生成Fe，后者在于菲羅啉顯色反應，可以測定血漿中*的含量。
五、測定的意義：
*在體內參與膠原物質合成，是*羥化酶和賴氨酸羥化酶的輔因子，是催化多巴胺轉變成去甲腎上腺的銅酶多巴β羥化酶所必需，當*缺乏時，合成的膠原得不到充分的羥化，不能很好的形成纖維。
*明顯的化學活性是作為還原劑，他可以將Fe還原成Fe，促使鐵在腸道吸收，促進鐵的貯存和利用。
抗壞血酸作為自由基清除劑，可以很快地與O,反應，更快地與反應生成抗壞血酸自由基，它也可以清楚O，因此，抗壞血酸可以保護機體免受內源性氧自由基的損傷。
*能與α-生育酚自由基還原成*，間接的起著鏈阻斷劑作用。
*是血漿中有效的抗氧化劑，是細胞外液抗氧化防御系統(tǒng)的道防線，Vc對血漿中正在進行著脂質過氧化作用也有阻斷作用。
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