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人源細胞實驗原理與成分的方法

2020-11-11  閱讀(990)

人源細胞試驗原理:

試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

人源細胞組成結構:

1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

5、 保存:如果樣品不立即人源細胞使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 

人源細胞成分: 

一、預包被板: 抗人源細胞-6兔子IgG,親合純化 96T

二、 酶標記抗體: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

三、標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2 

四、 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

五、 標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

六、顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

七、終止液: 1N硫酸 12mL x 1

八、濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗體和顯色劑)。 



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