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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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人胚腎細(xì)胞操作步驟
2020-8-26 閱讀(467)
人胚腎細(xì)胞操作步驟：
1. 人胚腎細(xì)胞可于白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在人胚腎細(xì)胞儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
2. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。
3. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中參與臨時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
4. 停止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
5. 效果判定：可于白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：人胚腎細(xì)胞類檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。人胚腎細(xì)胞類用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過液。次日洗刷3次。
6. 加一定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷。（一同做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）
7. 于反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。
8. 于各反應(yīng)孔中參與人胚腎細(xì)胞臨時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘
9. 于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml
特丁隆 標(biāo)準(zhǔn)品 ：34014-18-1 250mg
四氯硝基苯 標(biāo)準(zhǔn)品 ：117-18-0 250mg
氟苯脲 標(biāo)準(zhǔn)品 ：83121-18-0 250mg
七氟菊酯 標(biāo)準(zhǔn)品 ：79538-32-2 100mg
雙硫磷 標(biāo)準(zhǔn)品 ：3383-96-8 250mg
得殺草 標(biāo)準(zhǔn)品 ：149979-41-9 100mg
特草定 標(biāo)準(zhǔn)品 ：5902-51-2 250mg
特丁磷 標(biāo)準(zhǔn)品 ：13071-79-9 100mg
特丁凈 標(biāo)準(zhǔn)品 ：886-50-0 250mg
