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上海邦景實業有限公司
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ATCC細胞標本的稀釋原則
2018-3-16 閱讀(196)
ATCC細胞標本的稀釋原則：
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。
如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
操作流程：
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標記抗體工作液 100μl(取1μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制)，37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同標記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
ATCC細胞HAMSC 人羊膜間充質基質細胞 5 x 10^5 cells/vial
HCMSC 人絨毛膜間充質基質細胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-bm 人骨髓間充質干細胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-ad 人脂肪間充質干細胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-hp 人肝臟間充質干細胞 5 x 10^5 cells/vial
HUMSC 人臍帶間充質干細胞 5 x 10^5 cells/vial
HPMSC 人肺間充質干細胞 5 x 10^5 cells/vial
HVMSC 人脊柱間充質干細胞 5 x 10^5 cells/vial
HMMEC 人微血管內皮細胞 5 x 10^5 cells/vial
HMEpiC 人上皮細胞 5 x 10^5 cells/vial
HMF 人成纖維細胞 5 x 10^5 cells/vial
HUVEC 人臍靜脈內皮細胞 5 x 10^5 cells/vial
HUAEC 人臍動脈內皮細胞 5 x 10^5 cells/vial
HUVSMC 人臍靜脈平滑肌細胞 5 x 10^5 cells/vial
HUASMC 人臍動脈平滑肌細胞 5 x 10^5 cells/vial
RPC 大鼠垂體細胞 5 x 10^5 cells/vial
RMC 大鼠腦膜細胞 5 x 10^5 cells/vial
RN-r 大鼠腦脊神經元 1 x 10^6 cells/vial
RN-c 大鼠皮質神經元 1 x 10^6 cells/vial
RGC 大鼠顆粒細胞 1 x 10^6 cells/vial
RN-h 大鼠海馬神經元 1 x 10^6 cells/vial
RN-sn 大鼠黑質神經元 1 x 10^6 cells/vial
RN-s 大鼠紋狀體神經元 1 x 10^6 cells/vial
RN-vsc 大鼠腹脊髓神經元 1 x 10^6 cells/vial
RN-dsc 大鼠背脊髓神經元 1 x 10^6 cells/vial
ROPC 大鼠少突膠質前體細胞 5 x 10^5 cells/vial
RSC 大鼠雪旺細胞 5 x 10^5 cells/vial
RPNF 大鼠周神經成纖維細胞 5 x 10^5 cells/vial
RA 大鼠星形膠質細胞 5 x 10^5 cells/vial
RA-c 大鼠小腦星形膠質細胞 5 x 10^5 cells/vial
RA-h 大鼠海馬趾星形膠質細胞 5 x 10^5 cells/vial
RM 大鼠小膠質細胞 5 x 10^5 cells/vial
RLF 大鼠淋巴成纖維細胞 5 x 10^5 cells/vialATCC細胞
