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上海莼試生物技術有限公司
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假結核耶爾森菌PCR檢測試劑盒產生非特異性條帶方法
2020-8-12 閱讀(170)
假結核耶爾森菌PCR檢測試劑盒產生非特異性條帶
1)用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結果也顯示同樣條帶，則需要用DNase I重新處理樣品。
2)在PCR反應中，非特異的起始擴增將導致產生非特異性結果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進行退火，降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結果的產生。
3)由于mRNA剪切方式的不同，根據選擇引物的不同將導致產生不同的RT-PCR結果。
產生彌散（smear）條帶
1)在PCR反應體系中一鏈產物的含量過高
2)減少引物的用量
3)優化PCR反應條件/減少PCR的循環次數
4)在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時，其產生的寡核苷酸片段會產生非特異性擴增，一般會顯示為彌散背景。
