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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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豚鼠elisa試劑盒檢測中應(yīng)該注意的問題
2017-6-6 閱讀(451)
1、豚鼠elisa試劑盒的選擇
目前酶聯(lián)免疫法檢測用試劑盒種類繁多，有國外進口的，有國內(nèi)自行研制的，如何在眾多的品牌中選擇既能滿足檢測要求又價格低廉的試劑盒是一個問題。本人根據(jù)使用這些試劑盒，在實際檢測中發(fā)現(xiàn)，一般在試劑盒說明書中列出以下指標(biāo)：檢測限；回收率；交叉反應(yīng)率；標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜及數(shù)據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個濃度組成；IC50測定值及變形曲線點數(shù)目的是比較規(guī)范的試劑盒，可以選擇。
2、臨界值(cut-off)的確定
在實際使用酶聯(lián)免疫法檢測時要首先確定臨界值。通過檢測結(jié)果與臨界值的比較，可判定樣品為陰性或可疑。對于禁用藥物，檢測方法的臨界值為定量限，即現(xiàn)有的*的儀器檢測所能達到的定量限。對于有殘留*(MRL)的藥物，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測定的均值減去1．64倍標(biāo)準(zhǔn)差。檢測結(jié)果如小于臨界值為陰性，大于或等于臨界值或標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為可疑，需要用確證法確證。
3、豚鼠elisa試劑盒檢測限的測定可添加MRL和MRL上下各一個濃度。
每個試驗室在使用酶聯(lián)免疫法檢測時，應(yīng)做一下各自試驗室的檢測限。檢測限為20份空白樣品測定的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。如果經(jīng)規(guī)范操作后所得檢測限大于臨界值時，說明試劑盒背景干擾大，試劑盒靈敏度不能滿足檢測要求，應(yīng)與試劑盒或棄去不用選用另外的試劑盒。
4、酶聯(lián)免疫檢測方法驗證
在使用酶聯(lián)免疫法檢測樣品時，應(yīng)對方法進行驗證。主要測定以下內(nèi)容：
（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個濃度組成，測定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近，檢測靈敏度高。
（2）樣品檢測限的測定。
（3）樣品添加回收實驗。對禁用藥物可添加定量限和2倍定量限，對于有殘留*(MRL)的藥物，可添加MRL和MRL上下各一個濃度。
準(zhǔn)確度：若回收率大于40％符合相應(yīng)檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求。精密度：批內(nèi)變異系數(shù)每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25％，對于禁用藥物小于或等于30％。批間變異系數(shù)所有樣品間變異系數(shù)小于或等于30％，對于禁用藥物小于或等于40％。
滿足以上準(zhǔn)確度和精密度要求，說明酶聯(lián)免疫方法可行，可用來檢測藥物殘留。
5、其他
（1）對于可用于多殘留檢測的試劑盒，以交叉反應(yīng)率低的藥物做陽性添加測定臨界值(cut-off)。
（2）豚鼠elisa試劑盒實際檢測樣品時要包括以下實驗：至少做兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，兩個陰性對照品，兩個添加臨界值(cut-off)的陽性對照品，兩個平行的待檢樣品。檢測結(jié)果出來后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線形狀(符合檢測要求為S形)，IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率，樣品平行情況可確定檢測是否可信。
