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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)特定條件
2017-5-23 閱讀(365)
小鼠elisa試劑盒這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELISA試劑盒中，正常人血清反應(yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異，因此實(shí)驗(yàn)中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。
用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定，試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的。現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。
小鼠elisa試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，先計(jì)算陰性對照A值的平均數(shù)（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對照重新計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計(jì)算：陽性判定值=NCX+0.05，標(biāo)本A值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。
應(yīng)注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，而不是對各種試劑均可通用。在實(shí)驗(yàn)條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，ELISA試劑盒這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的A值后，計(jì)算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性（positive），而是病人（patient）的縮寫，不應(yīng)誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)多為各種測定所沿用。
小鼠elisa試劑盒實(shí)際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的ELISA試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類試劑盒規(guī)，如N<0.05（或其他數(shù)值），則按0.05計(jì)算，否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
