假使國產elisa試劑盒在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，人ELISA試劑盒雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。用化學方法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子形成*標記產物，標記方法頗為簡便。*與親和素的結合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反應大得多，兩者一經結合就極為穩定。

      因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時，ELISA試劑盒應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象，此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2，圖1-4)，人ELISA試劑盒如按常法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect)，因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果