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江蘇菲亞生物科技有限公司
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除去胎牛血清中脂肪酸的方法
2018-5-21 閱讀(1641)
胎牛血清是常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)液，在大部分試驗(yàn)中是不需要對(duì)胎牛血清中的脂肪酸進(jìn)行去除的，但是，在進(jìn)行某些特殊細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候?yàn)榱吮ＷC實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和我們要讀胎牛血清中的某些成分進(jìn)行去除，常見(jiàn)的脂肪酸去除，我們一般用一下方法。
1.溶解。取適量的胎牛血清白蛋白提取物，溶解于10倍的蒸餾水中，溶解溫度在23~27℃。 用濃度為0.2N的HCl，調(diào)節(jié)PH至3~3.5。
2.解析。充分溶解后的溶液胎牛血清白蛋白移至冰水混合物中進(jìn)行冰水浴，同時(shí)持續(xù)攪拌，維持30min。
3.吸附。加入5%的活性炭，混勻，混懸液將混懸液移至冰水混合物中進(jìn)行冰水浴，同時(shí)持續(xù)攪拌，維持1小時(shí)。過(guò)濾，濾渣回收后再利用。
4.濃縮。 濾液用0.2N的NaOH調(diào)節(jié)PH值至7.0，然后用20000分子量以下的超濾器進(jìn)行超濾濃縮。
5.凍干。將濃縮液按凍干曲線凍干，即將超濾后的濃縮液迅速冷凍至-40℃，持續(xù)1小時(shí)左右，升到-25℃，持續(xù)10～20小時(shí)，再緩慢升溫至０℃，維持１～４小時(shí)，升溫至保存溫度２０℃，分裝為成品。
