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江蘇菲亞生物科技有限公司
主營產品： 轉化生長因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍耳(PRRS)elisa kit |
公司信息
菲亞與您分享免疫組化的實驗步驟及特點
2017-3-9 閱讀(1126)
免疫組化實驗步驟：
1. 石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。
2. 取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復的，視具體情況而定）
3. 每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。
免疫組化特點：
1. 在切片加上一抗后，第二抗體標記多聚螯合物酶（HRP）的復合物與一抗結合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信號有顯著的放大，其敏感性較SABC、SP法高。
2. 由于多聚物在體內不存在，又不使用生物素，從而避免了由于生物素引起的非特異性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。
