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江蘇菲亞生物科技有限公司
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培養(yǎng)細(xì)胞遺傳學(xué)的檢測(cè)技術(shù)
2017-3-9 閱讀(915)
細(xì)胞培養(yǎng)是體外研究細(xì)胞生物學(xué)性狀、遺傳學(xué)及分子生物學(xué)特性zui直接有效的手段。培養(yǎng)細(xì)胞遺傳學(xué)的主要檢測(cè)技術(shù)，包括性染色體的檢測(cè)、染色體顯示、染色體顯帶及染色體基因定位等。對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的分子生物學(xué)檢測(cè)主要包括細(xì)胞DNA檢測(cè)、RNA檢測(cè)及蛋白質(zhì)的檢測(cè)，而相關(guān)的生物學(xué)檢測(cè)主要包括細(xì)胞酶學(xué)檢測(cè)及細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。
組織培養(yǎng)細(xì)胞是研究細(xì)胞遺傳zui便利、zui有效的方法和對(duì)象；也是揭示培養(yǎng)細(xì)胞性狀的重要方面。人二倍體細(xì)胞具有46條染色體數(shù)就是用細(xì)胞培養(yǎng)法所確定出來的。當(dāng)前已發(fā)展出染色體分帶、姊妹染色單體分化染色、染色體原位雜交等多種技術(shù)。近年染色體熒光基因標(biāo)記法又獲得迅速發(fā)展，使基因作為實(shí)體得以在染色體上顯現(xiàn)，從而*染色體和分子遺傳學(xué)之間的空白。染色體的研究已成為組織培養(yǎng)技術(shù)中重要組成部分。
一、性染色體檢測(cè)
(一)原理
在間期細(xì)胞核中，女性x染色質(zhì)和男性Y染色質(zhì)均可用特殊染色法顯示出來。女性的兩個(gè)x染色體中的一個(gè)，在間期時(shí)的染色質(zhì)呈異固縮(heteropycnosis)，呈深染的小體稱Barr氏體(圖9—1)。Barr氏體位于問期細(xì)胞核內(nèi)面，呈三角形或半月形小體，易為碳酸復(fù)葒等染料著色。正常女性Barr氏體陽性，男性為陰性。男性Y染色質(zhì)位于間期細(xì)胞核近中央部，易為鹽酸阿的平著色，熒光顯微鏡下觀察發(fā)較強(qiáng)熒光，呈點(diǎn)狀小體，發(fā)光部分系Y姿色體異固縮的長(zhǎng)臂。初代培養(yǎng)細(xì)胞和二倍體細(xì)胞株均可觀察到性染色質(zhì)，傳代細(xì)胞系表現(xiàn)不規(guī)律。
(二)方法
1.碳酸復(fù)紅(basic fuchsin)顯示x染色質(zhì)法
(1)材料：蓋玻片培養(yǎng)的細(xì)胞。
(2)染色液
儲(chǔ)存液：稱堿性復(fù)紅3g，溶于1OOml 70％乙醇中，可長(zhǎng)期保存。
工作液：(現(xiàn)用現(xiàn)配)
儲(chǔ)存液 10．0ml
5％石炭酸水溶液 90．0ml
冰醋酸 10．0 ml
甲醛(40％) 10．0ml
(3)染色步驟
1)細(xì)胞：蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞用37℃的BSS漂洗后，立即投入染色液內(nèi)染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用涂片標(biāo)本則應(yīng)待涂片干后，迅速投入96％酒精固定10～15min后再染色。
2)分化：用96％酒精分化lmin，分化時(shí)要不斷搖動(dòng)，把片子上多余的染料漂洗掉。
3)脫水：通過純酒精lmin。
4)封片：二甲苯透明2~3min，樹膠封固。
(4)結(jié)果：細(xì)胞質(zhì)不著色，細(xì)胞核染成紫紅色；陽性Barr氏體附于細(xì)胞核膜內(nèi)面呈三角或半月形小體。
2．熒光染色顯不Y染色質(zhì)法
(1)材料：蓋玻片培養(yǎng)的細(xì)胞。
(2)染色液
PBS(pH5．5～6．6) 100．0ml
鹽酸阿的平(atebrine) 0．2g
(3)染色步驟：Y染色質(zhì)顯示染色與染色體熒光顯帶法相同。
(4)結(jié)果：在熒光顯微鏡下觀察，Y染色質(zhì)呈特別明亮黃綠色熒光圓點(diǎn)，直徑0．25～ 0．3μm，可位于核內(nèi)任何位置，但以近中央時(shí)居多。
