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江蘇菲亞生物科技有限公司
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年底搶先看:實驗動物各種體液、骨髓樣本的采集方法
2017-3-9 閱讀(1228)
一、消化液的采集
(一) 唾液
1. 直接抽取法 在急性實驗中， 可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導管抽吸唾液，此法非常簡單，但從口腔抽吸唾液會有雜質混入。
2. 制造腮腺瘺法 在慢性實驗中,收集狗的唾液，要用外科手術方法將腮腺導管開口移向體外，即以腮腺導管為中心，切成一直徑約2～3cm的圓形粘膜片，將此粘膜片，與周圍組織分開，穿過皮膚切口引到頰外,將帶有導管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。
(二)胃液
1. 直接收集胃液法 急性實驗時，先將動物麻醉，將插胃管經口插入胃內,在灌胃管的出口連一注射器，用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動物。如是大鼠,需手術剖腹，從幽門端向胃內插入一塑料管，再由口腔經食道將一塑料管插入前胃，用pH7.5、35℃左右的生理鹽水，以12ml/h的流速灌胃，收集流出液，進行分析。
2. 制備胃瘺法 在慢性實驗中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動物的胃分離出一小部分，縫合起來形成小胃，主胃與小胃互不相通，主胃進行正常消化，從小胃可收集到純凈的胃液。應用該法，可以待動物恢復健康后，在動物清醒狀態下反復采集胃液。
(三)胰液和膽汁
在動物實驗中，主要是通過對胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開口于十二指腸降部，在緊靠腸壁處切開胰管，結扎固定并與導管相連，即可見無色的胰液流入導管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結扎和另行插管，可分別收集到胰液和膽汁。
二、腦脊液的采集
(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法：動物輕度麻醉后，側臥位固定，使頭部及尾部向腰部盡量彎曲，剪去第七腰椎周圍的被毛。消毒后操作者在動物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚，右手持腰穿刺針垂直刺入，當有落空感及動物的后肢跳動時，表明針已達椎管內( 蛛網膜下腔)，抽去針芯,即見腦脊液流出。如果無腦脊液流出，可能是沒有刺破蛛網膜。輕輕調節進針方向及角度，如果腦脊液流的太快，插入針芯稍加阻塞，以免導致顱內壓突然下降而形成腦疝。
(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法
在大鼠麻醉后，頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒，用手術刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側肌肉。為避免出血，zui深層附著在骨上的肌肉用手術刀背刮開，暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉，防止感染。采完腦脊液后，應注入等量的消毒生理鹽水，以保持原來腦脊髓腔的壓力。
三、骨髓的采集
1. 大鼠、小鼠骨髓的采集：用頸椎脫臼法處死動物,剝離出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的Hank平衡鹽溶液，沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作檢查，可將胸骨或股骨剪斷，將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上，混勻后涂片涼干即可染色即查。
2.大動物骨髓的采集：狗等大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚，然后估計好皮膚到骨髓的距離，把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊，右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入，穿入固定后，輕輕左右旋轉將穿刺針鉆入，當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。狗骨髓的采集，一般采用髂骨穿刺。
狗等大動物常用的骨髓穿刺點：胸骨：穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各點的中點。脛骨：穿刺部位是股骨內側、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺結束后要用膠布封貼穿刺孔，防止發生氣胸。
四、腹水的采集
抽取狗等大動物腹水，讓狗按自然站立位固定，穿刺部位在恥骨前緣與臍之間，腹中線兩側。剪毛消毒，局部浸潤麻醉。操作者左手姆、食指緊繃穿刺部位的皮膚，右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深，以免刺傷內臟。穿刺針進入腹腔后，腹水多時可見因腹壓高而自動流出。腹水太少可輕輕回抽，并同時稍稍轉動一下針頭，一旦有腹水流出，立即固定好針頭及注射器的位置連續抽取。
抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡單，用左手拇指及食指捏住動物頸部皮膚，無名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動物，使其腹部略朝上，在腹股溝和腹中線之間，消毒皮膚,用8號針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出，如腹水太少，可借助注射器抽取。
抽腹水時注意不可速度太快，腹水多時不要一次大量抽出，以免因腹壓突然下降導致動物出現循環功能障礙等問題。
