細胞:H522細胞
中文名稱:人肺腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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利用試管嬰兒中被遺棄的胚胎來產生正常的干細胞系,在胚胎發育到5—6天后,就能從中收集到一團特殊的細胞—內細胞團。
然后在培養皿中經過培養,這些內細胞團能發育成胚胎干細胞系,在合適的條件下這些胚胎可以再生成新的干細胞,也可以分化成心臟細胞、肝臟細胞、腦細胞等不同的細胞類型。
在這種干細胞形成的過程中科學家面臨的最大問題是,已形成的干細胞系可能發生變異,必須不斷合成新的干細胞系。
而克隆干細胞的過程比獲取正常胚胎干細胞更加復雜,難度也更大。科學家一般從皮膚細胞等成人細胞中提取DNA,然后將提取的DNA注入事先移去DNA的卵細胞中,于是卵細胞開始像正常胚胎那樣分裂,經過一段時間的發育,內細胞團形成,再利用內細胞團培養出干細胞。
已經成功地利用克隆的老鼠胚胎獲得干細胞,但在人類實驗中并沒有獲得成功。與自然受精的胚胎不同,克隆胚胎很難存活一個星期即5—6天左右,而只有活這么長時間的胚胎才能形成干細胞所需的內細胞團。
了解克隆過程后,我們就會知道并不是每個卵細胞都能成功地克隆出干細胞,因此存在一個成功率的問題,而科學家們所追求的就是利用最少的卵細胞克隆出最多的干細胞系;