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上海澤葉生物科技有限公司
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閱讀：732發布時間：2017-7-7
流式細胞儀檢測細胞凋亡方法之一
細胞凋亡早期改變發生在細胞膜表面，目前早期識別仍有困難。這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰*（PS）從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。
Annexin V是一種Ca2+依賴的磷脂結合蛋白，zui初發現是一種具有很強的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性。對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了。因此，可以建立一種用Annexin V結合在細胞膜表面作為凋亡的指示并結合一種染料排除試驗以檢測細胞膜的完整性的檢測方法。
Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。
流式細胞儀激發光波長用488nm，用一波長為515nm的通帶濾器檢測FITC熒光，另一波長大于560nm的濾器檢測PI。
凋亡細胞對所有用于細胞活性鑒定的染料如PI有抗染性，壞死細胞則不能。細胞膜有損傷的細胞的DNA可被PI著染產生紅色熒光，而細胞膜保持完好的細胞則不會有紅色熒光產生。因此，在細胞凋亡的早期PI不會著染而沒有紅色熒光信號。正常活細胞與此相似。在雙變量流式細胞儀的二維散點圖上，左下象限顯示活細胞，為（FITC-/PI-）；右上象限是非活細胞，即壞死細胞，為（FITC+/PI+）；而右下象限為凋亡細胞，顯現（FITC+/PI-）。
如上圖是流式細胞術分析TRAIL誘導的Jurkat細胞凋亡，從圖中可以看出，隨著TRAIL濃度的增加，凋亡細胞數量（右下象限）越來越多，即TRAIL能夠誘導Jurkat細胞的凋亡。
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