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上海澤葉生物科技有限公司
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閱讀：2669發布時間：2017-4-20
活化的caspase 3的檢測
半*天冬氨酸蛋白酶) 是近年發現的一組存在于細胞質中，活化位點均含有半*，且特異性斷開天冬氨酸殘基后肽鍵的蛋白酶。Caspase在細胞程序性死亡（又稱凋亡，apoptosis）中起重要作用。迄今為止，已經發現的人的caspase家族成員已達12種。
Caspase 3 是caspase家族的一個重要成員，其在細胞凋亡過程中作為zui主要的終末剪切酶行使作用。該蛋白由pro-caspase 3 酶原經過進一步的加工而形成，pro-caspase 3 是一個含有277個氨基酸殘基的前體蛋白，對其結構進行分析，可以分為以下四個部分：*部分是含有第1-9aa的前肽，第二部分是含有第10-28aa的前肽，第三部分是包含29-17a的大亞基，稱為p17，第四部分是包含176-277aa的小亞基，稱為p12 (圖1)。在凋亡開始時，pro-caspase3酶原可以被內源性的顆粒酶B和外源性的*等因素激活，使其在Asp28~Ser29和Asp175~Ser176兩處被剪切，形成p17和p12兩個亞基。此后，兩種亞基再組成具有活性的caspase 3，活化的caspase 3是含有2個p17亞基和2個p12亞基的異源四聚體，它可以通過對其主要的底物：多聚 (二磷酸腺苷-核糖)聚合酶 (poly (ADP-ribose)polymerase, PARP) 等進行剪切而誘導細胞凋亡的進行。
由于Caspase 3在凋亡過程中行使重要作用，并且其需要以活化的形式發揮功能，所以，對活化的caspase 3以及其活性的檢測就十分重要，公司針對Caspase 3的兩個亞基分別進行了序列分析、基因克隆和蛋白表達，獲得
了Caspase 3的兩個亞基的蛋白，其貨號分別為：和。在細胞凋亡的研究過程中，研究者可以同時使用p17 這兩種亞基蛋白，使其在試驗體系中組裝成為活化的Caspase 3，并發揮其在細胞調亡過程中的作用。
用這兩種蛋白作為免疫原分別免疫小鼠和兔后，獲得了單克隆抗體和多克隆抗體 。這些抗體可用于對pro-caspase 3的活化程度的定量或半定量檢測。圖2是一組通過Western blot對pro-caspase 3和p17／p12亞基含量的對比分析來確定Caspase3在實驗過程中活化的進程和速度的實驗數據。
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