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江蘇菲亞生物科技有限公司

雜交瘤細胞的選擇及抗體檢測

時間:2017-8-4閱讀:424
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1HAT選擇雜交瘤細胞    

    脾細胞和骨髓瘤細胞經PEG處理后,形成多種細胞的混合體,只有脾細胞與骨髓細胞形成的雜交瘤細胞才有意義。在HAT選擇培養液中培養時,由于骨髓瘤細胞缺乏胸苷激酶或次黃嘌呤*核糖轉移酶,故不能生長繁殖,而雜交瘤細胞具有上述兩種酶,在HAT選擇培養液可以生長繁殖。

  在用HAT選擇培養12天內,將有大量瘤細胞死亡,34天后瘤細胞消失,雜交細胞形成小集落,HAT選擇培養液維持710天后應換用HT培養液,再維持2周,改用一般培養液。在上述選擇培養期間,雜交瘤細胞布滿孔底1/10面積時,即可開始檢測特異性抗體,篩選出所需要的雜交瘤細胞系。在選擇培養期間,一般每23天換一半培養液。

2抗體的檢測   

    檢測抗體的方法應根據抗原的性質、抗體的類型不同,選擇不同的篩選方法,一般以快速、簡便、特異、敏感的方法為原則。放射免疫測定(RIA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)及免疫熒光試驗為常用的檢測方法。

    放射免疫測定可用于可溶性抗原、細胞McAb的檢測;酶聯免疫吸附試驗可用于可溶性抗原、細胞和病毒等McAb的檢測;免疫熒光試驗則適合于細胞表面抗原的McAb的檢測;其它還有間接血凝試驗、細胞毒性試驗、旋轉粘附雙層吸附試驗等方法。

 

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