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江蘇菲亞生物科技有限公司

瑞氏染液及其配制

時間:2017-7-20閱讀:489
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1、瑞氏染料是由堿性染料美藍(Methvlem blue和酸性染料黃色伊紅(EostmY)合稱伊紅美藍染料即瑞氏(美藍-伊紅Y)染料。

伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子,無色部分為陽離子,其有色部分為酸性,故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是堿性的,美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽,其有色部分為陽離子,無色部分為陰離子,恰與伊紅鈉鹽相反。

2、用甲醇作瑞氏染料溶劑,即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑,有兩種作用:

1)甲醇使瑞氏染料中美藍( M )與伊紅( E )在溶液中離解,可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。 

2)甲醇具有強大的脫水力,可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積,提高細胞對染料吸收作用,同時由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升溫,加速染色反應。

3. 瑞氏染液配制:

1 瑞氏染液配制: 瑞氏染料 830gm 1g甲醇( AR 500ml 600ml,先稱干燥(事先放入溫箱干燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內, 用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲 即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯一面鏡光澤,而無染料粉粒沉著,再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一 清潔儲存瓶內(用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重復數次,直至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口,存室溫暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存 3 個月以上為佳。

2 緩沖液

1 緩沖液作用:染色對氫離子濃度是十分敏感的,據觀察 pH 值的改變,可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩定, PBS pH 一般在 6.4~6.8 ,偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用,偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用,使 pH 恒定。

2 緩沖液配制( pH6.4~6.8 ,弱酸性):

  配方 1 配方 2

  1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml

  1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml

  H2O 新鮮 加至 1000ml

  置室溫黑暗處,瓶口密封,防止霉菌污染,如有污染則應報廢。

 

 

 

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