魚（ Fish ）皮質醇（ Cortisol ）ELISA 檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗 （ELISA） 。 往預
先包被皮質醇（Cortisol）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準
品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色 ，
TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色， 并在酸的作用下轉化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的皮質醇（Cortisol）呈正相關。用酶
標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值） ，計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞
刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿： EDTA、 檸檬酸鹽或肝素抗凝。 3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭： 0.5-10uL、 2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解
后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中， 密封 （低溫干燥） 保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明
書操作時樣本已經稀釋 5 倍，zui終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻

詳細說明書見附件！

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