大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒elisa實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。
一、洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。
二、封閉更關鍵
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低特異結合，產生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們與開放位點結合并封閉，同時穩定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
三、抗體濃度須優化
我們通常會記錄每次試驗留下來的操作步驟，但是如果試劑稍有不同，則可能需要優化抗體的量。記住，非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
四、檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔心，依次查看ELISA系統中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優化，相信很快就會有漂亮的結果。

大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒實驗測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數=樣品數+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標板加上蓋，37℃反應 90 分鐘。 
4．反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應 20-25 分鐘 （注意：顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時藍色立轉黃色。 
11．用酶標儀在 450nm 測定 OD值。

大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒786-116    RNase-DETECT™    100 Tests
786-117    Water, DEPC-Treated    125ml
786-118    Water, DEPC-Treated    500ml
786-119    Western ReProbe™ [5X]    100ml
786-11X    CB-X™ Protein Assay (No BSA Standard)    500 Assays
786-120    UPPA-PROTEIN-Concentrate™ (Micro)    For 10ml Sample
786-121    UPPA-PROTEIN-Concentrate™ (Medi)    For 30ml Sample
786-122    UPPA™-I & II Pack    For >80ml 
786-123    PAGE-Perfect™    50 Preps
786-123T    PAGE-Perfect™    5 Preps
786-124    Perfect-FOCUS™    50 Preps
786-124T    Perfect-FOCUS™    6 Preps
786-125    OrgoSol-PROTEIN-Concentrate™    For 5ml Protein 
786-126    Column-PROTEIN-Concentrate™    For 4mg protein
786-127    OrgoSol DetergentOUT™ (Micro)    For 10ml Sample
786-128    OrgoSol DetergentOUT™ (Medi)    For 30ml Sample
786-129    SDS Detection Kit    15 Assays
786-12X    CB-X™ Protein Assay with Albumin Standard    500 Assays
786-12XT    CB-X™ Protein Assay    10 Assays
786-13    SG-Chymotrypsin™    2 x 25µg
786-130    Total Arrest™ RNA (Micro)    50 Preps
786-131    Total Arrest™ RNA (Medi)    10 Preps
786-132    GET™ Total RNA    50 Preps
786-133    Arrest™ Extraction Buffer    200 Preps
786-134    Yeast Geno-DNA-Template™    100 Preps
786-135    Plant Geno-DNA-Template™    100 Preps
786-136    OmniPrep™    150 Preps
786-137    Protease Screening Kit    50 Assays
786-138    Molecular Grinding Resin™    5 X 1ml
786-138P    Pestles & Tubes    100 Pestle & 100 Tubes
786-138PR    Molecular Grinding Resin™ with Pestles & Tubes    5 x 1ml with 100 Pestles & Tubes
786-139    EZ-Grind™    20 Pestle & 20 Tubes with Resin
786-14    SG-Lysine-C™    2 x 5µg