大鼠軟骨糖蛋白39(GP39)ELISA試劑盒可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、 細胞培養上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定,有些 則需經預處理。
1)血清:
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。收集上清。如 有沉淀形成,應再次離心。
2)血漿:
應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。
3)尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成, 應再次離心。
4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集 上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5)細胞:
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養液,用PBS、理鹽水或無血清培養液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后,細胞 就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉 淀。如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上 清,即可進行后續操作。
6)組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
大鼠軟骨糖蛋白39(GP39)ELISA試劑盒實驗操作注意事項
1.試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性;一般加樣時間控制在10分鐘內,如果樣本數量過多,可使用多道移液器。
3.孵育:樣品要在密閉的容器內進行孵育,嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
4.洗滌:洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標儀讀數。
5.反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請提前加入終止液終止反應。
6.建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
7.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經銷商,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調換,但概不承擔產品本身以外的任何損失。
結果判斷
1. 30分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;
2. 以OD值為縱坐標,以標準品的濃度為橫坐標,繪制曲線圖;
3. 根據樣品的OD值查找對應的濃度范圍;
大鼠軟骨糖蛋白39(GP39)ELISA試劑盒0105-500G EDTA DISODIUM SALT DIHYDRATE 乙二胺四乙酸二鈉,二水 BIOTECHNOLOGY GRADE R RT
0106-100G L-ALANINE L-丙氨酸 HIGH PURITY GRADE R RT
0106-250G L-ALANINE L-丙氨酸 HIGH PURITY GRADE R RT
0106-500G L-ALANINE L-丙氨酸 HIGH PURITY GRADE R RT
0108-100G N-ACETYL-L-CYSTEINE N-乙酰-L-半胱氨酸 USP GRADE R RT
0108-25G N-ACETYL-L-CYSTEINE N-乙酰-L-半胱氨酸 USP GRADE R RT
0109-100G EOSIN Y DISODIUM SALT 伊紅Y鈉鹽 CERTIFIABLE GRADE R RT
0114-100G BEEF EXTRACT POWDER 牛肉浸粉 HIGH PURITY GRADE R RT
0114-500G BEEF EXTRACT POWDER 牛肉浸粉 HIGH PURITY GRADE R RT
0114-50G BEEF EXTRACT POWDER 牛肉浸粉 HIGH PURITY GRADE R RT
0118-1KG GUANIDINE HYDROCHLORIDE 鹽酸胍 TECHNICAL GRADE R RT
0118-500G GUANIDINE HYDROCHLORIDE 鹽酸胍 TECHNICAL GRADE R RT