小鼠脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）ELISA試劑盒

●用途： For research use only. Not for diagnostic use.
●特點(diǎn)：靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好
●服務(wù)：子科生物所有的elisa試劑盒均可免費(fèi)代測(cè)，全程Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)。
深圳子科生物ELISA試劑盒供應(yīng)商，擁有10年的研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，擁有*的儀器設(shè)備，專業(yè)的技術(shù)人員和*的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，目前已經(jīng)建立強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，品牌設(shè)立為：ZIKER 。產(chǎn)品詳細(xì)報(bào)價(jià)可以咨詢我們公司客服人員。

小鼠脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）ELISA試劑盒

一般的生物標(biāo)本包括有：
血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等，一般為無(wú)菌操作，低溫保存(-80℃、液氮)。
一．如果采集的實(shí)質(zhì)器官則要求：
1、 器官實(shí)質(zhì)不能太小
2、 以采集實(shí)質(zhì)性病灶區(qū)為佳：如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
3、 同一病例裝入同一容器，并做好標(biāo)記
4、 應(yīng)在0-8℃的低溫儲(chǔ)存和運(yùn)輸
5、 實(shí)質(zhì)性器官的處理：
5.1、取實(shí)質(zhì)性器官約0.5mg左右，充分剪碎或研磨
5.2、加入約500ul的/生鹽水，充分混勻
5.3、離心5000rmp x10min，去上清
5.4、-20℃保存，作為待檢標(biāo)本(切勿反復(fù)凍融)
二．體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清，它們的主要區(qū)別就是：血清凝血而血漿不凝血，所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時(shí)一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽)，采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />1.2、如要采集血清，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室溫或4℃靜置半小時(shí)后，800-1000rmp x 5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般飯后半小時(shí)內(nèi)不易采集，因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶，的采集的時(shí)間時(shí)空腹采集；
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的，即現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般隔夜尿不采集；
4、組織提取液如肺泡灌洗液等，采集后離心分離，800-1000rmp x 5min，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />三、糞便以及天然孔排泄物：采集后一般現(xiàn)用/生鹽水溶解，充分混勻，800-1000rmp x 5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />四、活檢組織一般進(jìn)行穿刺檢測(cè)，zui常見的就是肝活檢，像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進(jìn)行活檢簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確。
五、表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)
(一)真核表達(dá)產(chǎn)物
1、 細(xì)胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；
1.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmp x10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmp x10min， -20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；
2、 細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，然后用001M (pH 7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中， DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；
2.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01M (pH 7.4)重懸，500-800rmp x10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中， DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmp x10min，取上清， -20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；
(二)原核(大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng))表達(dá)產(chǎn)物
1、表達(dá)上清(非融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出，10000rmp x10min，棄上清，沉淀用洗一遍，500-800rmp x10min，棄上清，DDW重懸沉淀，冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；

小鼠脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）ELISA試劑盒操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對(duì)照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；(不含空白對(duì)照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí)；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對(duì)照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；

結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍；

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