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感受態細胞轉化效率

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為確定感受態細胞的轉化效率,可將一定量的完整質粒轉化到感受態細胞中,取一部分轉化的細菌,涂布到選擇培養基上,可用菌落生長單位/μg DNA,按下面的方法計算感受態細胞的轉化效率.計算公式:轉化效率=產生菌落的總數/鋪板DNA的總量。

例如,取1μl(0.1 ng/μl)完整的質粒轉化100μl的感受態細胞. 向轉化反應液中加入900μl培養液,讓細菌恢復一小段時間,取100μl鋪板.培養過夜,產生1000個菌落。轉化0.1 ng DNA,用SOC稀釋到1000μl后,取1/10涂平板,則涂平板共用0.01 ng DNA 質粒,所以轉化率=1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg。

轉化效率1×10 6 cfu/μg DNA可滿足普通的亞克隆實驗;1×10 7 cfu/μg DNA用于作更復雜的亞克隆,有*的DNA的轉化,T-克隆實驗;構建文庫和突變要求用的轉化的效率為>1×10 8 cfu/μg DNA。
 

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