人封閉抗體（BA）Elisa試劑盒說明書

人封閉抗體（BA）Elisa試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:96T   4ng/L - 120ng/L

使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中封閉抗體（BA））含量。

實驗原理:本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中封閉抗體（BA）水平。用純化的人封閉抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入封閉抗體（BA），再與HRP 標記的人封閉抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的封閉抗體（BA）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人封閉抗體（BA）濃度。

人封閉抗體（BA）Elisa試劑盒組成:

1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶

2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（240ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份

5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張

6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個

標本要求:

1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟:

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120ng/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

60ng/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

30ng/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

15ng/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

7.5ng/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定:以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結：計算,以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:2-8℃。

2.有效期:6個月