硫酸*LISA試劑盒使用步驟

工作液準(zhǔn)備

1 硫酸多粘菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用

3 *：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用

4 顯色劑：已備用，避免光線直照

5 反應(yīng)終止液：已備用

樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）

1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液

2強(qiáng)力振蕩3分鐘

3用Whatman 濾紙過濾

4取100μl處理后的樣品，加入400μl*

5取25μl處理后的樣品，加入25μl*于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）

硫酸多粘菌素步驟

1 實(shí)驗(yàn)須知

1.1 實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（252℃），時(shí)間約2小時(shí)。回溫室溫（252℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度。

1.2 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存

1.3 請(qǐng)不要改變分析程序

1.4 請(qǐng)使用的微量移液器

1.5 操作一旦開始，請(qǐng)不要中斷任何程序

1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性*程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作

1.7 為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣

1.8 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

2 分析步驟

2.1 預(yù)*行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，*進(jìn)行雙孔檢測

2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

2.3 樣品稀釋液（10）、濃縮洗滌液（20）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）

2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液

2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

2.7 在所有孔中加入50μl的抗硫酸多粘菌素抗體酶結(jié)合物

2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。

3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）

甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

4 反應(yīng)

4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A，再加 50μ顯色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻

4.2 37℃溫浴10min

4.3 每孔中加入50μl終止液，混勻

4.4 在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。