免疫組化染色前處理技術(shù)操作規(guī)范

時(shí)間：2017/4/18閱讀：292

1．金標(biāo)檢測(cè)試劑盒取材：理想的取材厚度是0.2cm～0.3cm，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都認(rèn)為組織在加熱抗原修復(fù)過(guò)程中造成脫片的主要原因是取材過(guò)厚或脫水浸蠟處理不當(dāng)所致。良好的取材、固定、脫水過(guò)程是免疫組化質(zhì)控的前提，如果H&E切片都做不出滿(mǎn)意的染色結(jié)果，那么免疫組化染色也將無(wú)從談起，根本無(wú)法保證染色質(zhì)量。
2．固定：在眾多的組織固定液中（如甲醛、乙醇、戊二醛、多聚甲醛等），金標(biāo)檢測(cè)試劑盒不同的實(shí)驗(yàn)方法在使用上各有千秋。但在保持組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性、抗原可測(cè)定性、組織滲透性以及試劑的價(jià)格上，福爾馬林是、既經(jīng)濟(jì)又通用。而含酸或含汞的固定液對(duì)抗原保存均不理想。組織離體后固定一般不要超過(guò)30分鐘，在常溫條件下固定時(shí)間為8-24小時(shí)。同時(shí)還要注意避免福爾馬林過(guò)度固定造成的組織抗原丟失，有研究發(fā)現(xiàn)新鮮組織經(jīng)過(guò)福爾馬林一周固定后組織抗原丟失嚴(yán)重，抗原幾乎不能被檢測(cè)，因?yàn)榻M織固定后會(huì)引起蛋白或蛋白分子之間形成交聯(lián)，導(dǎo)致抗原位點(diǎn)遮蓋，可以通過(guò)抗原修復(fù)方法來(lái)修正，若加抗體前不采用抗原修復(fù)，則免疫組化染色常不能到達(dá)理想結(jié)果或不成功。組織同樣不能長(zhǎng)時(shí)間放置在70%的乙醇中，酒精固定后的組織形態(tài)不如福爾馬林固定的組織。脫鈣液對(duì)抗原破壞較為嚴(yán)重，因此在組織脫鈣前在福爾馬林液中固定48小時(shí)，若組織沒(méi)有固定透則酸會(huì)破壞抗原，脫鈣液中酸的濃度與脫鈣時(shí)間都必須盡量控制在zui低的限度金標(biāo)檢測(cè)試劑盒。

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