佳和試劑-免疫親和純化技術概述

           elisa試劑盒親和層析技術是純化各種生物大分子zui有效的方法之一。zui早是將抗體作為一種結合劑用于免疫親和純化，根據其自身交連產生大量多聚體和不溶性基質原理收集抗原。隨后，利用抗體與惰性的微珠共價結合。雖然這種反應是一種簡單的結合，但抗體的許多反應性因缺乏定位作用或抗體的過量結合而喪失。下圖顯示應用一種定位方法成功地保證了抗體的抗原結合區能較容易與抗原接合。通過研究發現，抗體與蛋白A或蛋白G微珠共價連接后更容易與抗原結合。將具有良好抗原結合特性且來源廣泛的各種單克隆抗體制成免疫親和層析柱，已成為一種zui適用和有效的純化方法。

                elisa試劑盒為不同飽和度抗體與抗原的結合量，將吸附兔抗鼠Is的瓊脂糖

CL-4B微珠與50％飽和度(11ms／m1微珠)和遞增量OKT9抗體結合。100％飽和度時OKT9單抗與兔抗鼠18的比值為2：1(w／w)；100％：22mgOKT9，75％：16．5rug OKT9，50％二llmg OKT9，25％：5．5mgOKT9，10％二2．2mgOKT9／ml微珠。插入圖表示經過SDS-PAGE之后  每個濃度點的抗原區帶。各數值均為3次實驗的平均值。用一種免疫介質一步法純化膜蛋白。

    免疫親和純化具有以下特點：①抗體與其相應抗原結合具有高度親和力和特異性，能大量分離天然狀態或近似天然狀態的抗原；②不是所有的抗體都適用于免疫親和純化，但一旦獲得一種性能良好的抗體，純化過程就很快速而且可靠；③可按照不同規模進行，半天內即可完成，而且可以獲得其他層析法不可比擬的純化效果；④經過簡單的改進，免疫親和法也可用于純化針對不同抗原的特異性抗體。

親合純化是一種zui有效的分離抗原的技術。雖然下述的所有實例都是以蛋白質抗原作為研究對象，但凡是能與抗體有效結合的分子都能用這種方法進行純化。此法相當簡單。將抗體共價結合到一種惰性的微珠上，然后將微珠與含有抗原的溶液混合。當抗原被微珠基質上的抗體捕獲后，通過洗滌去除無關的抗原。然后用洗脫緩沖液處理微珠，純化的抗原被釋放，并適用于進一步研究。如果洗脫條件掌握較好而且較溫和，釋放的抗原仍保持天然狀態。

只需簡單地改變操作程序，免疫親和純化法同樣也可以用來分離經過初步純化的抗體。此時抗原和抗體所起的作用正好相反，抗原以共價連接到微珠上，再與抗體結合，然后通過洗脫釋放出來。

    在條件合適的情況下，應用免疫親合純化法通常只需一次就可以達到1000—10 000倍的純化效果。使用性能特別優良的抗體或在洗脫條件掌握相當好時，也可以達到10 000倍以上的純化效果。

免疫親和純化可分為3個步驟

    1．將抗體與基質共價連接。

    2．將抗原結合到抗體—微珠基質上。

    3．抗原的洗脫。

    *步，先將單克隆抗體或經過親和純化的多克隆抗體以共價方式吸附到固相基質上。除特殊情況外，一般不推薦使用未經純化的多抗，因為從多抗層析柱上洗脫抗原非常困難，通常需要以適當的條件先使抗原變性。抗體以共價方式連接到固相基質上有很多不同的方案，但將抗體連接到蛋白A或蛋白G微珠上可能zui簡單。另一種有用的方法是將抗體共價連接到經過化學修飾使其具有活性基團的微珠上。

    抗體-微珠基質制備好后，將抗原結合到抗體上，然后通過洗滌去除混合的大分子物質。第三步是用較強的洗脫條件處理免疫復合物，破壞抗體與抗原相互作用，抗原即被釋放到洗脫液中。

    免疫親和純化習慣上分為3個步驟：①抗體親和層析柱的制備；②將抗原結合到抗體—微珠基質上；③從層析柱上洗脫抗原。

    親和層析技術zui先是由Cuatrecasa3等人建立(1968)。