C3d的定量檢測(cè)采用ELISA雙抗體夾心法，其原理為抗C3d血清能與C3、C3b、C3bi發(fā)生交叉反應(yīng)，根據(jù)C3SP與C3在不同濃度PEG中溶解度的不同，用11％PEG溶解待測(cè)樣本中C3d，然后加至包被抗C3d反應(yīng)板中，再依次加入HRP標(biāo)記的抗C3d抗體和底物OPD/H202，用4mol/L H2S04終止反應(yīng)，于492nm讀取吸光度，C3d含量與其吸光度呈正相關(guān)。
1．10mmol／LEDTA抗凝正常人或病人全血，2500r／rain離心10min,取血漿置—70℃保存。
2．C3d標(biāo)準(zhǔn)品的制備 將菊糖按3mg／mL與正常人血清混合，37℃孵育1h，2000r／min離心30min，取上清作為C3d標(biāo)準(zhǔn)品。100ulC3d標(biāo)準(zhǔn)品加等體積22％（W／V）PEG 6 0004℃孵育1h，混合物于4℃2000r／min離心30rain，取上清用含0．01％BSA的PBS 1：1 000稀釋，然后對(duì)倍稀釋到1：25 600。
3．用1．0／ug／mL、5．0ug／mL、10．0ug／mL三個(gè)濃度的兔抗人C3d抗體（Dakpatt產(chǎn)品）分別包被三個(gè)酶標(biāo)板，每孔100t&4℃24h，次日取出，每孔加含1％BSA的PBS 100／uL，37℃21h，然后加上述稀釋的上清100uL混勻，37℃反應(yīng)1h，用0．5％酪蛋白緩沖液洗滌3次，加100uLl：1 000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗人C3d抗體，37℃ 45rain，用0．5％酪蛋白緩沖液洗滌2次，zui后用PBS洗1次，每孔加lOOuL0．4mg／mL OPD底物溶液，然后加4mol／L H2S04終止反應(yīng)，于酶標(biāo)儀上492nm讀取OD值。
4．樣本中C3d的檢測(cè) 選擇上述反應(yīng)性好，結(jié)果清楚的酶標(biāo)板的抗體濃度作為工作濃度，包被酶標(biāo)板，4cC24h。取待檢樣本（血漿、尿液或腦脊液）100／uL加lOOgL 22％（W／V）PEG6 000,4T；1h，然后4℃2000r／min離心30min，取上清。正常人血漿上清1：250稀釋、尿液1：8釋、腦脊液1：32稀釋，病人血漿上清1；1 000稀釋、尿液、腦脊液同正常人，稀釋液為PBS。用含0．01％BSA的PBS從1：400-1：6,1130對(duì)倍稀釋C3d標(biāo)準(zhǔn)品，然后將各稀釋度的C3d標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋的樣本各100ti分別加入包被有兔抗人C3d抗體的酶標(biāo)板中，隨后操作同步驟（3）。
5．結(jié)果計(jì)算 樣本C3d的定量測(cè)定用AU／L（設(shè)想單位）表示，C3d標(biāo)準(zhǔn)品1：250稀釋度被為1 600AU／L，依次類推。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍為100—6．2U／L，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣本中C3d含量。
正常值：血漿為8．48±1。91AU／L（X±1SD），尿液為0．87±0。61mAU／L。
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