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提取干血斑中的DNA樣本

閱讀：479發(fā)布時(shí)間：2017-8-23

DNA提取需在II級生物安全柜內(nèi)完成
1.用打孔器將6mm直徑大小的DBS打入1.5ml的離心管中，用燒灼和酒精搽拭的方法消毒打孔器頭部。
2.每個(gè)離心管中加入1ml去離子水，渦旋10秒，在管壁外側(cè)做離心方向標(biāo)記；
3.將離心管置于搖床上，轉(zhuǎn)速500-600轉(zhuǎn)/分，室溫，搖動15分鐘；
4.室溫下，離心管12500×g，離心3分鐘；
5.小心從離心管中吸去上清約950μl去離子水，留50μl于管中；
6.重復(fù)2-5步；
7.每管中加入新鮮配置的10% Chelex100 Resin 150μl（0.1克Resin / 1ml去離子水），渦旋混勻10秒；
8.室溫下，離心管12500×g，離心3分鐘；
9.水浴箱中56℃，溫育2小時(shí)；
10.取出離心管輕輕振蕩；
11.放入100℃開水中煮沸8分鐘；
12. 室溫下，離心管12500×g，離心3分鐘；
13.立即小心吸取100-120μl上清（應(yīng)避免吸到Chelex100樹脂，其對PCR有抑制作用）于干凈的管中；
14.放于-20℃保存。



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