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特異性抗體檢測(cè)的目的首先是協(xié)助臨床診斷,在某些疾病中亦是觀察療效及預(yù)后的一個(gè)指標(biāo),預(yù)防接種效果的觀察,以及傳染病流行病學(xué)調(diào)查中,特異性抗體的檢測(cè)也具有特殊的、重要的意義。
原理
在免疫應(yīng)答中,細(xì)胞免疫和體液免疫是兩個(gè)密切相關(guān)、互為調(diào)節(jié)的生理過(guò)程。對(duì)這兩種免疫反應(yīng)都有許多檢測(cè)方法,但迄今為止,在臨床檢驗(yàn)工作中,以體液免疫反應(yīng)中的特異性抗體的檢測(cè)應(yīng)用zui廣泛。
方法
現(xiàn)在抗體檢測(cè)的方法眾多,除傳統(tǒng)的沉淀反應(yīng),凝集試驗(yàn),補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)外,標(biāo)記免疫測(cè)定(如酶聯(lián)免疫測(cè)定、放射免疫測(cè)定、熒光免疫測(cè)定、發(fā)光免疫測(cè)定等)已成為主要的免疫測(cè)定技術(shù),免疫印跡法也發(fā)揮了明顯的作用,一些快速測(cè)定法(如快速斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn))也被廣泛使用。
注意問(wèn)題
不同的檢測(cè)方法,靈敏度、準(zhǔn)確性、重復(fù)性并不*相同,加上試劑盒質(zhì)量不一,都影響到試驗(yàn)結(jié)果。在應(yīng)用或建立一個(gè)方法時(shí),檢測(cè)系統(tǒng)中所有成分的濃度必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格滴定,選擇zui恰當(dāng)?shù)臐舛确秶@缑嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),抗原及酶結(jié)合物濃度低,zui后吸光度值太小,易出現(xiàn)假陰性,如濃度太高,吸光度值偏大,甚至移到標(biāo)準(zhǔn)曲線的平臺(tái),即處于不敏感的范圍便會(huì)明顯影響結(jié)果的可靠性。
為了保證試驗(yàn)的特異性和敏感性,無(wú)論是顆粒性抗原、組織提取物、多肽抗原、重組抗原都必須純化,否則容易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。在應(yīng)用標(biāo)記免疫分析中,可引起本底數(shù)值的增高,極大地影響試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。在檢測(cè)自身抗體時(shí),許多抗原是用組織提取物,更應(yīng)注意抗原的純化問(wèn)題。由于不同組織、器官間可存在相同抗原成分,使得同一自身免疫病,可檢出幾種不同自身抗體,同一自身抗體又可出現(xiàn)在不同自身免疫病中,這就影響了檢驗(yàn)的特異性。因此提示我們,關(guān)于這方面特異性抗原的提取、純化和合成,還有許多工作要做,是一項(xiàng)任重道遠(yuǎn)的任務(wù)。還必須指出,無(wú)論檢測(cè)哪一種抗體,所用抗原的片段或成分的不同,都可影響其特異性及敏感性。因此采用一種新抗原時(shí),需要進(jìn)行嚴(yán)格對(duì)照,方可確定其應(yīng)用價(jià)值。
抗體有保護(hù)性抗體,非保護(hù)性抗體之分,有些抗體的水平達(dá)到高峰后旋即下降乃至消失,有些抗體可長(zhǎng)期存在直至終身。如乙肝核心抗體(抗-HBc),陽(yáng)性率可高達(dá)70%左右,臨床醫(yī)生常因此產(chǎn)生困惑。其實(shí)這是抗-HBc的總抗體,可能長(zhǎng)期存在。如其滴度低,即為既往感染過(guò)乙肝,有流行病學(xué)意義,高滴度才有臨床診斷意義。再如自身抗體測(cè)定中,少數(shù)正常人也存在有少量自身抗體,它不僅對(duì)機(jī)體無(wú)害,而且能幫助機(jī)體清除衰老及變質(zhì)的細(xì)胞對(duì)機(jī)體有利。
另外,在臨床診斷中,須針對(duì)不同發(fā)病機(jī)理檢測(cè)相應(yīng)抗體,如I型超敏反應(yīng)應(yīng)檢測(cè)IgE,而在Ⅱ型超敏反應(yīng)主要測(cè)IgG、IgM型抗體,又如鼻咽癌患者查的是EB病毒殼膜抗原-IgA(IgA/VCA抗體)。另外抗體測(cè)定和其他檢驗(yàn)一樣,存在著假陽(yáng)性、假陰性的問(wèn)題,可能由于方法學(xué)的不完善引起,或者由于機(jī)體反應(yīng)性的不同所致,在解釋結(jié)果時(shí)務(wù)必注意。
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