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上海通蔚生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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ELISA試劑盒試驗(yàn)差錯(cuò)注意事項(xiàng)

時(shí)間:2017-2-13閱讀:1209
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ELISA試劑盒能夠簡(jiǎn)略、地從瓊脂糖凝膠上純化收回DNA段,一起除掉蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。可收回100bp–40 kb DNA段,可純化高達(dá)10μg的DNA段,收回率可達(dá)80%以上(<100bp或>10kb的DNA段收回率為30–50%)。運(yùn)用ELISA試劑盒收回的DNA可適用于各種慣例操作,包含酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、銜接和轉(zhuǎn)化等各種分子生物學(xué)試驗(yàn)。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1、 不一樣廠家出產(chǎn)的試劑盒因出產(chǎn)工藝和操作方法略有不一樣,必須依照所用試劑盒嚴(yán)厲操作,不然簡(jiǎn)單發(fā)生檢查成果的不確定性.
2、 若不一樣批號(hào)試劑的不一樣組分(A液或酶工作液),或不一樣
試劑的不一樣組分進(jìn)行穿插運(yùn)用,有也許呈現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。

3、 加樣時(shí)樣品量差錯(cuò),關(guān)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值鄰近的標(biāo)本影響極大,建議校正加樣器。
4、 反應(yīng)時(shí)間的差錯(cuò),做很多標(biāo)本時(shí),孔和zui后一孔以及一些特別標(biāo)本也許影響較大。
5、 由于滴瓶的精密性必定不如加樣器,不掃除不一樣滴頭滴量的差錯(cuò)。別的滴加過(guò)程中是不是發(fā)生氣泡、速度是不是均勻,是不是顫抖等影響液量的要素均可致使以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)求時(shí)應(yīng)運(yùn)用加樣器。
6、 閾值鄰近實(shí)踐上是個(gè)灰區(qū)(gray scale),不能截然分為陰性、陽(yáng)性,國(guó)外廠家均請(qǐng)求對(duì)這有些可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢,以次數(shù)多者為準(zhǔn),如一次陽(yáng)兩次陰zui后判為陰,但實(shí)踐上是不是為陰不好說(shuō),只要判為可疑,上能夠讓病人過(guò)一段時(shí)間后再測(cè)。
7、 肉眼觀察稍顯色,酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)踐工作中是難以避免的,肉眼目測(cè)成果不可靠,應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
8、
ELISA試劑盒由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽(yáng)性因素多為操作過(guò)程中漏加試劑等有關(guān)。
9、 臨界值鄰近標(biāo)本動(dòng)搖為正常現(xiàn)象,任何試劑均不可避免。能夠思考將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

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