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上海通蔚生物|ELISAELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性

時(shí)間:2024/5/27閱讀:780
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簡單介紹在ELISA實(shí)驗(yàn)中對不同類型樣本的處理方法,ELISA實(shí)驗(yàn)中正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的第一步。

1、血漿

ELISA實(shí)驗(yàn)用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融,避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

2、 細(xì)胞培養(yǎng)上清

 取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)取上清。(-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。)

3、 細(xì)胞裂解液

 (1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用yi酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。(懸浮細(xì)胞可省略)

 (2)收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

 (3)加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL      PBS重懸。

 (4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。

 (5)4℃10000×g離心10min,除去細(xì)胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。)

 4、 血清

血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一晚上,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清大程度的析出)。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。


小結(jié): ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,故應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為保證檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本盡量在1~6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。(保證樣本不含NaN3,NaN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。)

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