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上海酶聯生物研究所
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閱讀：645發布時間：2010-11-3
1） 細胞準備。
對單層生長細胞，在傳代培養時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。
（2） 固定。
根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min。
（3） 通透。
使用交聯劑（如多聚甲醛）固定后的細胞，一般需要在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處理，以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應充分考慮抗原蛋白的性質。通透的時間一般在5-15min。通透后用PBS洗滌3×5 min。
（4） 封閉。
使用封閉液對細胞進行封閉，時間一般為30min。
（5） 一抗結合。
室溫孵育1h或者4℃過夜。PBST漂洗3次，每次沖洗5min。
（6） 二抗結合。
間接免疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h。PBST漂洗3次，每次沖洗5min后，再用蒸餾水漂洗一次。
（7） 封片及檢測。
滴加封片劑一滴，封片，熒光顯微鏡檢查。
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