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上海源葉生物科技有限公司
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閱讀:830發布時間:2011-12-17
1.定義 乙酰*受體(AChR)是一種膜離子通道的低聚物。乙酰*由運動神經末梢釋放結合至AChR兩個。亞單位上,使*通道打開,允許陽離子順化學梯度彌散至肌肉,產生終板電位,在MG患者中抗乙酰*受體的抗體使終板的乙酰*受體數減少,但由于終板電位通常較閾電位要高,AChR中度減少不會引起臨床癥狀。終板電位高于閾電位的程度隨種類明顯不同,并在不同個體肌肉內也相差很大,可能導致重癥肌無力(MG)的不同臨床表現。神經肌肉遞質的傳遞的解剖學及生理學在此不詳細的討論。
2.結構及來源 AChR有五個亞單位α2,β,δ,ε構成一個*孔道。正常成人肌肉AChR局限在終板的突觸后膜;正常健康成人的肌肉提純AChR,只有0.3 pm01/g的得率。在胎兒肌肉或原代培養的肌細胞中AChR可在整個成肌細胞及肌管內檢測到。隨著肌纖維發育成熟、肌細胞受神經支配,AchR逐漸局限于終板區域,隨后γ亞單位被ε取代。在人類,胎兒型AchR在妊娠33周時被成人型取代,而嚙齒動物這種轉變是在出生后進行。如果去神經支配發生在成熟后,則雖然終板處乙酰*受體密度仍很高,但丁亞單位會再次出現在肌纖維的表面。因此,胎兒及去神經支配的肌肉可用于純化AChR。
胸腺髓質中含有類肌細胞,名為“myoid”。myoid能表達胎兒型AchR,在胎兒及新生兒胸腺中zui常見,但也可在成人的胸腺中找到。它們在重癥肌無力病因學上的作用尚未闡明。
人類肌細胞AChR可從手術后標本中獲得,天然肌細胞膜部分可用相同容量的2%TritonXl00抽提獲得,在抽提物中需加入苯甲基雙乙磺丙烷氟化物和其他蛋白水解酶抑制劑,4℃時可保存1~2周,在一70℃時可保存幾個月。
3.純化 AchR對a-BuTx的高親和力和特異性確保了檢測的特異性和敏感性,因此不需要做抗原純化。抽提時用2—3nM125I-α-BuTx (比活必須在3000/mrn01)作親和劑。要注意的是,如果用僅表達刪L型AchR的細胞作為原料,成人型AChR特異性自身抗體容易漏檢,可能導致陰性結果增加7%。
4.序列特性 AChR的基因首先是從一些魚類的發電器官中克隆出來并測得序列,目前已經克隆出許多物種包括人類的AChRcDNA。個體間的亞單位有顯著的相似性,且不同物種間也有較多的同源性。然而,抗原表位卻有顯著差異,因而用人類或靈長類的乙酰*受體作為抗原來作免疫測定診斷*。
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