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技術文章

熒光偏振免疫分析

閱讀:934發布時間:2011-1-12

熒光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)是一種定量免疫分析技術,其基本原理是熒光物質經單一平面的藍偏振光(485nm)照射后,吸收光能躍入激發態,隨后回復至基態,并發出單一平面的偏振熒光(525nm)。偏振熒光的強弱程度與熒光分子的大小呈正相關,與其(受激發時)轉動的速度呈反相關。FPIAzui適宜檢測小至中等分子物質,常用于藥物、激素的測定。

FPIA采用競爭反應的原理,在缺乏未標記分析物(通常是待測樣品)時熒光信號zui強;加入末標記分析物后,在已標記和未標記樣品之間的競爭將減弱熒光信號。熒光信號強度與游離的分析物的濃度成正比,與待測樣品中未標記分析物的濃度成反比。通過測定一系列已知濃度的標準晶,繪制競爭結合抑制標準曲線。經與標準反應曲線比較而得到定量值。以測定半抗原藥物的濃度為例,反應系統內除待測藥物外,同時加入一定量用熒光物質標記的相應藥物(小分子),二者與有*的特異性抗體(大分子)競爭結合。當待測藥物濃度高時,經過競爭,與大部分抗體結合,而標記藥物則呈游離的小分子狀態,因此在液相中轉動速度較快,測得的偏振熒光強度也較低。反之,待測藥物濃度低時,大部分標記藥物與抗體結合,形成大分子的標記抗原抗體復合物,在液相中轉動速度較慢,此時檢測到的偏振熒光強度也較高。測定反應系統的偏振光大小,從標準曲線上就可地得知樣品中待測藥物的相應含量。

FPIA法的優點是靈敏度高,例如測定Digoxin的靈敏度可達0.2ng/m1,精密度高、速度快、操作簡便,樣品用量少,儀器不需要每日校準。缺點是儀器設備昂貴,藥品試劑盒專屬性強,需進口。

 


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