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技術文章

庚型肝炎病毒檢測

閱讀:286發(fā)布時間:2010-11-17

庚型肝炎病毒(HGV)呈世界性分布,與人類急性和(或)慢性肝炎有關。主要以血液途徑傳播,如輸血及血制品、靜脈吸毒、使用污染的注射器、經常接觸血源等。HGV為單股正鏈RNA病毒,基因組全長9 392個核苷酸。基因結構分為:5’非編碼區(qū)、編碼區(qū)(結構區(qū)和非結構區(qū))、3’非編碼區(qū),結構區(qū)編碼核心蛋白和包膜蛋白,非結構區(qū)有NSl、NS2、NS3、NS4、NSs等5個區(qū),其中NS2編碼蛋白酶。庚型肝炎病毒(HGV)實驗室檢測指標主要為HGVAb-IgG。
[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 庚型肝炎病毒(HGV)特異性抗原預包被于微孔板條上,樣品加入已有樣品稀釋液的反應孔中,在隨后的溫育過程中,若樣品中含特異性抗體(HGVAb—IgG),則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到微孔板上,再加入酶標記的第2抗體,zui終形成抗原—抗體—酶標記第2抗體復合物,洗滌除去未結合的游離酶,加入顯色劑后顯色。反之,若樣品中不含特異性抗體(HGVAb-IgG),則加入顯色劑后不顯色。
[標本準備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.包被反應板
2.樣品稀釋液
3.陰性對照
4.陽性對照
5.洗滌劑
6.酶標記第2抗體
7.顯色劑A、B
8.終止液
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.用加樣器在微孔反應條中加入樣品稀釋液,每孔100ul。
2.將待測標本各l0ul分別加人已有樣品稀釋液的各孔中,直接加陰性對照、陽性對照各100u1,設空白對照1孔。
3.充分混勻,37℃環(huán)境中溫育20min。
4.傾去內容物,用洗滌液洗板5次,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
5.各孔加入酶標記第2抗體100fA,振蕩混勻。
6.傾去內容物,用洗滌液洗板5次,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
7.每孔加入顯色劑A、B各1滴,顯色10min。
8.終止顯色后,在酶標儀上比色(波長為450nm),樣品吸光度大于陰性對照2.1倍者為陽性。
[注意事項]
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時應置室溫平衡30min后方可使用,未用完的微孔條用自封袋密封保存,溫育酶標板的時間和溫度必須嚴格控制。
2.加液時必須用移液器,并經常校對移液器的準確性。
3.洗滌時各孔均需加滿洗滌液,防止孔內有游離酶不能洗凈。使用洗板機洗滌應設定30~60s浸泡時間。
4.所有樣品和廢棄物都應按傳染源處理,終止液為2mol/L的硫酸,使用時必須注意安全。
5.操作過程中禁止將預包被微孔板與其他試劑、次氯酸類消毒劑接觸。
[正常參考值] HGVAb-IgG陰性
[臨床意義] HGVAb-IgG陽性是對HGV進行診斷的重要依據。HGVAb-IgG持續(xù)時間較長,具有流行病學調查意義。
 


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