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勁馬專注科研試劑盒的研發及銷售多年，涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域，滿足您實驗所需，以實現與客戶的雙贏，完善的庫存及供應體系以及穩定的專業技術，保證產品均能現貨供應。期待您前來咨詢選購。今天小編給大家帶來的是：WB實驗結果“膜上一片空白”，什么原因導致的呢？一起來看看吧！
一、膠和膜放反了：如果在轉印的過程中，膠和膜的位置顛倒了，那么蛋白就從膠上轉移到緩沖液中，而不會到達膜上。對于標準的轉印，凝膠應靠近三明治的負極，而膜對應正極。
二、轉膜效率低：轉膜效率受多種因素影響，包括蛋白的大小、凝膠中丙烯酰胺的百分比、電場強度、轉印時間和緩沖液的PH值。一般來說，蛋白越大，轉移的越慢。轉移大蛋白的方法是用高的電場強度。而小蛋白長時間處于高電場強度下可能會傳出轉印膜。避免這個問題的方法是用0.2μm孔徑的PVDF膜進行轉印。如果蛋白的等電點接近緩沖液的pH值，那么這個蛋白攜帶的電荷很少，在電場中頁幾乎不移動。如果你的目的蛋白是強堿性的，那么你可以用碳酸鹽(pH9.9)、CAPS(pH11)及酸性緩沖液。
三、試劑放置太久或存放條件不正確：抗體會慢慢降解，如果反復凍融的話，它會快速降解。底物應儲存在-20℃。
四、抗體不純或滴度太低：一抗的濃度差異很大，應該根據經驗來決定一抗的稀釋度。一般的原則是以1：100-1:1000來稀釋血清或組織培養上清，以1：1000-1：10000來稀釋腹水或超免疫動物的血清。Bio-Rad的印跡級別的二抗稀釋度是1：3000。
五、酶失活了：疊氮鈉是辣根過氧化物酶的抑制劑。不要再HRP顯色的western blot中使用任何含疊氮鈉的試劑。疊氮鈉可以用于堿性磷酸酶結合的抗體中，而*。另外，只能使用蒸餾的去離子水。
六、使用Tween-20洗滌：Tween-20(吐溫-20)可能會干擾某些抗體-抗體相互作用，或洗去PVDF膜上的目的蛋白。因此除了封閉之后的次洗滌，其他洗滌過程中都不使用Tween-20。
七、檢測系統缺乏足夠的靈敏度：確保蛋白的上樣量在檢測系統的靈敏度范圍內。
勁馬成為國內生命科學領域ELISA試劑盒的主要供應商之一，代理許多先進水平的試劑盒，包括分子生物學、細胞生物學、免疫學等多個研究及應用領域，期待能與更多科研單位深入合作，共同打造生物行業一片藍天。
