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在ELISA實驗檢測過程中,標本質量可以說是zui重要的關鍵因素。如果實驗標本質量不過關,即使您的實驗操作技術再膩害也無濟于事。今天上海勁馬小編就帶大家來看看在ELISA實驗中,標本都容易出現的七大問題及解決辦法:
1.凝血不充分:
此類錯誤排在*位,主要是抗凝血中存在小凝塊,多發生在血常規檢測中,為采血后標本沒有充分顛倒混勻所致;另外,標本量過多,由于抗凝劑的相對不足,血漿中出現微血凝塊的可能性增加。微血凝塊除易阻塞檢測儀器外,由于血液內部分成分的消耗而影響檢測結果。一份只有仔細檢查才能發現小凝塊的標本,可以使血小板降低30%甚至更多,紅細胞、白細胞計數也可以降低10%左右。我們規定,對用于血常規的標本均輕輕顛倒并仔細觀察,絕大部分可以檢查出。
2.抗凝劑與血液比例不正確:
在凝血功能測定中,常有一些標本量明顯不足,特別是兒童和入院檢查病人標本,由于小孩采血難,入院時需檢查項目多,zui易發生抽血量不足,使PT、KPTT和TT假性延長,將誤導臨床診治。因此,血液未到刻度的標本一律退回重抽。
3.標本溶血:
許多指標在紅細胞內和血清(血漿)明顯不同,溶血可使LDH、HBDH、血K+、AST 、ALT或等值異常升高。此類錯誤是采血時的一些不良習慣造成,如:壓脈時間過長,采血不順利、抽血速度太快、血液注入容器時未取下針頭或用力過猛、等均可造成溶血。我們作過實驗,選擇20位體格檢查者,用兩種方法進行比較:⑴用注射器抽血后不去除針頭直接將針頭插入真空采血管,這時在真空管負壓作用下針管內的血液被吸入;⑵用注射器抽血后先除去針頭,然后打開真空采血管蓋子緩緩注入標本,兩種采血方法的標本同時作部分生化項目檢測,結果是:前者比后者LDH上升23.4%-58.2%,平均33.7%;HBDH上升22.5%-61.4%,平均35.4%;AST上升6.7%-31.6%,平均13.7%;ALT上升4.7%-18.2%,平均11.4%;血K+上升23.7%-71.2%,平均36.1%,其它如TP、GGT和UREA等也有或多或少的變化。因此,我們主張用真空采血系統自然流出的標本為宜,如果必須用注射器抽血,抽血后要取下針頭,再緩緩將血液注入標本采集管。對于未用真空采血系統的單位,若注射器和針頭連接不緊,采血時有空氣進入或產生泡沫,使用劣質采血器,標本收集管沒有干燥均易造成溶血。
4.采血部位不當:
有些病人需多次檢查,或輸液時間較長,有的護士會在病人輸液更換瓶子時放出一些血液送檢,即使先去除前面的10ml血液,結果也有明顯變化。如一例輸脂肪乳后直接從輸液的靜脈中采血,導致了許多結果錯誤,影響前三位的是:TG為12.4mmol/L(平時為1.0 mmol/L左右),血小板達560×109/L(上升了4倍多),總蛋白濃度從60左右上升到91.6(g/L)。其它常有明顯影響的有血糖、血電解質等項目。雖臨床也知道正確的采血方法,但由于護理人員流動性大,工作量超負荷,不時有此類標本送檢,只有反復與臨床溝通、宣傳,加上對標本審核,對于血細胞比例明顯不對,結果不合理或有異常變化,及時與臨床,減少不合格報告發出。
5.采血量不足:
對于血培養而言,采血過少可降低培養的陽性率。有文獻報告,當培養的血量從2ml增加至20ml時,血培養的陽性率增加30%—50%,培養血量每增加1ml,陽性率增加3%—5%。由于標本已經注入培養瓶,不能檢查是否符合要求,只有加強溝通交流,共同努力提高檢驗質量。
6.標本采集時間不當:
對細菌培養、激素檢查、找瘧原蟲或絲蟲病原體,需在特定的時間,以提高陽性率。
7.標本運送和處理不及時:
標本的運送雖不屬采集范疇,但標本采集再規范,若不能及時送檢,將嚴重影響檢驗質量。尿常規標本需在二小時內檢測完成,否則細胞等有形成分開始破壞;離體過長的標本作血細胞分析時會影響分類結果;生化檢測的標本也因為細胞內外物質交換而變化。我們要求標本及時送檢,到檢驗中心的標本盡快測定,不能及時測定的生化、免疫等標本及時分離血清,加蓋并置4℃冷藏。
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