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上海勁馬的長期發展目標是以化學試劑為基礎,產品線逐步擴展到抗體、蛋白組學、基因組學、分離材料等試劑領域,通過自主研發和兼并重組不斷擴展企業產品線,逐步發展為試劑的專業商和電子商務集成供應商,成為試劑行業發展的者。開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。
細胞與試劑方面:
1、細胞(單層細胞,鏡檢適合)
2、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等適合細胞有要求的培養液)
3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)
4、7.5%NaHC03 溶液
5、0.25%胰蛋白酶
6、 PBS 洗液。
實驗小用具方面:
1、小方瓶(100m1)
2、克氏瓶
3、膠塞
4、吸管(10ml、1m1)
5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)
6、C02 孵箱
7、超凈臺
8、倒置顯微鏡
9、4℃、- 20℃冰箱
細胞傳代的操作步驟
1、挑選細胞:鏡檢細胞,挑選生長狀態良好,細胞界限清晰,具有立體感,形態好無污染、無異常及可疑病變細胞。
2、配制細胞培養液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養液100ml 內,加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。
3、消化細胞:先用PBS 洗液沖洗細胞表面1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞表面。
4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細胞培養液吹打分散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養量。
5、加塞,置于37±1℃孵箱培養。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。
6、填寫傳代記錄。
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