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犬腎上腺素(EPI)Elisa試劑盒操作步驟

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犬腎上腺素(EPI)Elisa試劑盒操作步驟
.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。 
80 ng/L  5 號標準品 50µl的原倍標準品加入 50µl標準品稀釋液 
40 ng/L  4 號標準品 50µl的5 號標準品加入 50µl標準品稀釋液 
20 ng/L  3 號標準品 50µl的4 號標準品加入 50µl標準品稀釋液 
0 ng/L  2 號標準品 50µl的3 號標準品加入 50µl標準品稀釋液 
5 ng/L   號標準品 50µl的2 號標準品加入 50µl標準品稀釋液 
 
2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl, 
然后再加待測樣品 0µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 
3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。    
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5次,拍干。 
6.  加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。  
7.  溫育:操作同 3。 
8.  洗滌:操作同 5。 
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
0 分鐘. 
0.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 
.  測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 5 分鐘以內進行。

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