星形膠質的培養

    星形膠質細胞在中樞神經系統中發揮著多種作用，組成血腦脊液屏障，營養和支持神經元，與神經元突觸的發生有著密切。

1．材料

(1)材料來源：新生1周內大鼠的腦組織。

(2)手術器械：解剖剪、解剖鑷、眼科剪和*。

(3)培養瓶或培養皿：用O．01％PLL涂布底壁，備用。

(4)清洗液：HBSS。

(5)消化液：O．05％*。

(6)培養液：DMEM和F12(1：1，V／V)混合培養液，添加15％FBS、6g／L葡萄糖、10萬I U／L*和100mg／L，*。

2．方法

(1)取材：在無菌條件下，通過頸動脈放血處死動物，分離出大鼠大腦皮質。用預冷的HBSS沖洗3次后，在解剖顯微鏡下*剔除腦膜和表面血管。將皮質剪成1mm3左右的小塊。

(2)消化：剪碎后加入O．05％*，將組織塊放37℃水浴中振蕩消化30min。然后，加入培養液，終止消化，用吸管輕輕吹打，離心(1000r／min，10min)。

(3)細胞懸液制備：吸去上清液，加入新鮮培養液．然后用吸管輕輕吹打至組織塊消散。調整細胞濃度至O．5×106個／ml，將細胞接種于培養瓶中．培養：30min。翻轉培養瓶，吸出瓶中含未貼壁細胞的培養液，用100目濾器過濾，將濾液離心(1000r／min，10min)。

(4)培養細胞：吸去上清液，用培養液懸浮沉淀細胞，將細胞接種于培養瓶中，放培養箱中靜置培養。3d后換培養液，以后每隔2～3d換液1次。培養9～lOd。當細胞分層生長時，將培養瓶放入恒溫水浴振蕩器內，在37℃條件下螺旋水平振蕩15～18h。吸去懸液，剩余的貼壁細胞即為星形膠質細胞。然后，進行傳代培養。

3．結果觀察培養4h后，可見細胞長出細小突起。培養3～5d后，細胞數目增多，星形膠質細胞的比例逐漸增大。9～10d后，細胞長滿瓶壁，細胞分層生長，星形膠質細胞貼于底壁，少突膠質細胞位于星形膠質細胞層上面。經振蕩純化后，少突膠質細胞脫落，得到貼壁的星形膠質細胞。可用抗膠質原纖維性蛋白免疫細胞化學方法染色鑒定星形膠質細胞。

4．注意事項應注意振蕩時間，以保證星形膠質細胞與少突膠質細胞的分離。