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隨著分子生物學的發(fā)展,越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學的各種試驗技術(shù),并研制成套試劑盒,使基因克隆表達變得越來越容易。但分子生物學的上游工作往往并非是zui終目的,分子克隆與表達的關(guān)鍵是要拿到純的表達產(chǎn)物,以研究其生物學作用,或者大量生產(chǎn)出可用于疾病治療的生物制品。相對與上游工作來說,分子克隆的下游工作顯得更難,蛋白純化工作非常復雜。
蛋白質(zhì)純化的方法選擇
隨著分子生物學的發(fā)展,越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學的各種試驗技術(shù),并研制成套試劑盒,使基因克隆表達變得越來越容易。但分子生物學的上游工作往往并非是zui終目的,分子克隆與表達的關(guān)鍵是要拿到純的表達產(chǎn)物,以研究其生物學作用,或者大量生產(chǎn)出可用于疾病治療的生物制品。相對與上游工作來說,分子克隆的下游工作顯得更難,蛋白純化工作非常復雜,除了要保證純度外,蛋白產(chǎn)品還必須保持其生物學活性。
純化工藝必須能夠每次都能產(chǎn)生相同數(shù)量和質(zhì)量的蛋白,重復性良好。這就要求應用適應性非常強的方法而不是用能得到純蛋白的方法去純化蛋白。在實驗室條件下的好方法卻可能在大規(guī)模生產(chǎn)應用中失敗,因為后者要求規(guī)模化,且在每日的應用中要有很好的重復性。本文綜述了蛋白質(zhì)純化的基本原則和各種蛋白純化技術(shù)的原理、優(yōu)點及局限性,以期對蛋白純化的方法選擇及整體方案的制定提供一定的指導。
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