(1)無毒和無菌

    無毒和無菌是體外培養細胞的首要環境條件。細胞在活體內，偶爾有細菌或有害物質入侵，因體內有強大的解毒系統和免疫系統，可將其解毒或清除，而不易受損害。但在離體的環境中，失去了防御系統，一旦有害物質入侵或細菌污染，可導致細胞死亡，前功盡棄。如培養瓶皿、支持物、培養基、瓶蓋、瓶塞上若有細胞毒性，在培養過程中可導致細胞死亡。因此，在選用這些器皿、材料時要注意，若這些物品消毒不*，帶菌或操作過程不小心使細胞污染，也會導致細胞死亡。若出現交叉污染，可使實驗室原來的細胞系失去原有特性，應引起足夠的重視。

(2)輻射線和超聲波

1．可見光可見光的波長是390～780nm。可見光的各種有色光能引起細胞蛻變，延長核分裂的問期，還可顯著降低細胞的附壁能力。因此，體外培養細胞應避免日光直接照射，在黑暗中進行培養或短期存放。

2．紫外線弱紫外線下耐受能力強的細胞變化不大，但對敏感的細胞有損害。紫外線強時，新分離的細胞顯示：不能進行*的有絲分裂；在有絲分裂時增加了脫水收縮；在有絲分裂時細胞質的起泡減少。Elrlich腹水癌細胞經紫外線照射后，用飛點紫外線顯微鏡觀察發現被照射表面形成水泡，隨后細胞膨脹，損害也漸變嚴重。

3．放射線X射線對細胞有明顯損傷。β射線可影響細胞核的分裂。γ射線使核分裂數減少并出現不正常的核分裂，可使細胞死亡。

4．超聲波和振動在超聲波振動下，細胞很快會破裂，開始是胞質發生紊亂的流動，原生質膠體結核也有明顯變化，若停止超聲波振動可回復。細胞致死的原因是由于產生空化作用所致。當超聲波在2．5w／cm2時，細胞受損，染色體發生畸變，首先發生畸變的是核染色體。

(3)細胞接種濃度(密度)

    在體外培養細胞中，細胞接種數對細胞的生長有影響，適宜的接種密度，可以促使細胞增殖，接種密度太低或太高都不利于細胞的生長增殖。如果培養液與細胞的容積比例大于2000：1，生長物質彌散到細胞外的比例將是細胞內達到低于zui小限度的濃度，此時細胞不能再增殖，培養液中的pH變堿，抑制細胞生長，細胞變圓不能貼壁，甚至引起細胞死亡等。如果接種密度太高，每個細胞周圍培養液的容積降至O．007mm3以下，由于彌散率的降低，細胞內生物質的濃度增加，容易使排除物或其他代謝產物達到飽和，能量來源也很快耗盡．因此也會妨礙細胞的增殖。

    如何選擇適宜的接種濃度要根據細胞的代謝和生長繁殖速度以及工作的需要而確定。一般來說，細胞代謝旺盛、生長速度快的細胞如腫瘤細胞，接種濃度宦偏低；而正常組織細胞生長較慢，代謝不夠旺盛，接種濃度可偏高；如果是為了保種或不需急用，接種濃度可偏低些；有時為了便于觀察細胞形態結構，接種濃度也可適當降低。

(4)容器轉動速度和懸浮攪動速度

    有時為了研究的需要而將培養細胞在容器中進行旋轉或攪動，如貼壁細胞在旋轉管中培養，使轉鼓的轉速提高，細胞增殖率隨之提高。其原因可能是轉動使足夠的營養流動和較充分的氧化作用之故。

    當懸浮攪拌培養細胞時，攪拌速度既不能太快，也不能太慢。如太慢，細胞易結團、下沉和貼壁，不利于細胞在懸浮狀態下增殖。如果太快．容易起泡沫，細胞易窒息致死，同時，強烈地攪動易使細胞因機械損傷而破裂。所以選擇適宜的攪拌速度很重要。如BHK2l的攪拌速度適宜為460～330r／min；淋巴細胞(Raji)株，在200r／min和400r／min時細胞致不增不減，或稍有下降，而攪拌速度增加到600r／min時出現生長；類淋巴細胞(Namal—va)生長速度快，在80～100r／min時既不結團，又不需加抗泡沫劑，且細胞生長仍然很快。各種細胞的適宜攪拌速度不一致，通常與細胞的特性和質量有關，予以注意。