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小鼠肝細胞培養實驗步驟

閱讀：315發布時間：2016-3-24

小鼠肝細胞培養實驗步驟
一、實驗步驟
1. 將小鼠斷頸致死，置 75%酒精泡2-3 秒鐘，取肝臟，置于盛有 PBS 的平皿中。

2. 剔除脂肪、結締組織、血液等雜物，轉移到另一個盛有 PBS 液的平皿中。

3. 用*將臟器剪成小塊(大小約 1mm2)，玻片研磨，轉到離心管，離心(1000 rpm，5 min)。

4. 視組織或細胞量加額加入5-6 倍(3-5 ml)*，37℃中消化 20 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。

5. 加入3-5 ml 含血清的培養液以中止*消化作用。

6. 用100 目孔徑濾網濾過，除去未消化的大組織塊。

7. 再次離心5 min，棄上清液。

8. 加入無血清培養液5 ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。

9. 加入含血清的培養液 l-2 ml (視細胞量)，血球計數板計數。

10. 將細胞調整到5×105/ml 左右，轉移至6 孔培養板中，37℃下培養。小鼠肝細胞培養實驗步驟

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